应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR模板不同，摸索的平台期循环数会变吗？
51/1返回列表
查看: 528  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

yorkham

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR模板不同，摸索的平台期循环数会变吗？

还是做半定量RT-PCR的问题，在摸索引物的最佳退火温度和循环数时，我先摸好退火温度，但摸循环数时换了模板（几个循环都用这个模板），也找到了平台期，但我想问，假如我再换个模板的话，这个平台期会不会因模板不同而改变？（我做污染物浓度梯度对基因表达影响）
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-02-17 16:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
呃，这样吧，诀窍就是，抽完RNA，定量，摸好循环数
然后以后要重复实验的话，就必需加入当量的RNA去RT（浓了就稀释，少了就多加）
赞一下 回复此楼
2楼2009-02-17 16:37:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yorkham

铜虫 (小有名气)
我知道，我做梯度试验，一个正常组，一个处理组，提完RNA，RT时调好了模板的量（使加入的RNA量一样），但是用正常组模板摸的循环数和用处理组模板摸的循环数会一样吗？我只做了35循环的，这两个处理组的灰度是不一样的(一样的话我设的梯度也没意义了，呵呵)
赞一下 回复此楼
3楼2009-02-17 17:04:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
一样的啊~不就是为了比较control和处理的某个基因的mRNA水平差异吗
比如预想中control高于处理
那么用control的摸，摸到刚好有条带或者稍微亮一点的循环数，就确定下来了
处理组可能这个循环还扩不出来（最理想，有和无的区别就不需要所谓的统计学）
或者条带很淡之类的

35个循环，也太多了
赞一下 回复此楼
4楼2009-02-17 18:08:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yorkham

铜虫 (小有名气)
好，谢谢三磷酸腺苷，十分感谢
赞一下 回复此楼
5楼2009-02-17 20:27:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yorkham 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭