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哆啦哆啦梦

新虫 (初入文坛)

[交流] 甲基化容易发生在什么过程中?转化还是提质粒? 已有3人参与

各位大神,小仙在构建载体过程中发现nde1和X-ba1切不下来了,T载体,老师说可能发现了甲基化。那么问题就来了,甲基化容易发生在什么过程中呢?转化还是提质粒?如果发生在转化过程中,那么再次划线重提质粒就没有必要了。。。。。。只能重新做转化。看网上有大神说,大肠的感受态细胞分甲基化缺失的和不缺失的,我用的DH5α,也不知道缺不缺失
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mengqiang327

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
从DH5α的基因型可以看出(商业化的感受态细胞说明书上都会有),DH5α不是甲基化酶缺陷型,也就是说你转进去的质粒在DH5α体内随细胞增殖而复制的过程中会被甲基化。如果想要制备非甲基化的质粒DNA,可以使用甲基化酶缺陷型大肠杆菌,比如JM110或者HST04

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胸膛走在思想前面的烟酒僧
5楼2017-10-10 00:40:46
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zhyxin

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-01 09:48:24
Xba1酶切位点容易发生甲基化,DH5α不行

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2楼2017-09-30 18:48:14
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zhyxin

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
要用甲基化酶敲出的感受态

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3楼2017-09-30 18:51:31
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zhyxin

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
甲基化发生在转化后,感受态增殖过程

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4楼2017-10-01 22:04:53
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