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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 产物太短，与二聚体靠近，怎样减少二聚体？
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yorkham

铜虫 (小有名气)

[交流] 产物太短，与二聚体靠近，怎样减少二聚体？

做半定量RT-PCR表达时，因基因序列比较小，设计的产物长度160bp，导致跑出条带与引物二聚体很靠近，这样的结果应该不能用，请问如何能将下方的二聚体消除？谢谢大家！

[ Last edited by yorkham on 2009-2-17 at 13:31 ]
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1楼 2009-02-17 13:30:09
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yoyocan

金虫 (正式写手)
引物减少点试试看！
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2楼2009-02-17 13:43:05
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-31 14:32
1、用热启动酶
2、减少引物量
3、用2%的胶跑，跑久一点
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3楼2009-02-17 14:53:35
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yorkham

铜虫 (小有名气)
谢谢大家，我试试改变跑胶的浓度和时间
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4楼2009-02-17 16:00:42
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jasco

木虫 (正式写手)
还可以在pcr的时候提高退火温度试试
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5楼2009-02-17 16:09:32
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-31 14:33
1.重新设计引物：避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
2.降低引物浓度和使用高保真的taq酶（SIGMA:jump start Taq酶等等）
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会当凌绝顶，一览众山小
6楼2009-02-18 02:27:12
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