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yorkham

铜虫 (小有名气)

[交流] 产物太短,与二聚体靠近,怎样减少二聚体?

做半定量RT-PCR表达时,因基因序列比较小,设计的产物长度160bp,导致跑出条带与引物二聚体很靠近,这样的结果应该不能用,请问如何能将下方的二聚体消除?谢谢大家!

[ Last edited by yorkham on 2009-2-17 at 13:31 ]
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yoyocan

金虫 (正式写手)

引物减少点试试看!
2楼2009-02-17 13:43:05
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-31 14:32
1、用热启动酶
2、减少引物量
3、用2%的胶跑,跑久一点
3楼2009-02-17 14:53:35
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yorkham

铜虫 (小有名气)

谢谢大家,我试试改变跑胶的浓度和时间
4楼2009-02-17 16:00:42
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jasco

木虫 (正式写手)

还可以在pcr的时候提高退火温度试试
5楼2009-02-17 16:09:32
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-31 14:33
1.重新设计引物:避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
2.降低引物浓度和使用高保真的taq酶(SIGMA:jump start Taq酶等等)
会当凌绝顶,一览众山小
6楼2009-02-18 02:27:12
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