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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白酶解以后的多肽溶液保存在4℃有没有影响
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)

[交流] 蛋白酶解以后的多肽溶液保存在4℃有没有影响

本人最近在用胰蛋白酶对组蛋白进行水解，水解后的多肽溶液当时放置在4℃冰箱中一段时间，后来经过脱盐处理，进行液相色谱-质谱分析。想请问，水解后的多肽溶液放置在4℃环境中，对多肽本身会产生什么样的影响，对后续的液相色谱-质谱鉴定会有影响吗？
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1楼 2017-09-24 23:43:39
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渊博震天

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wuhao4850103: 金币+10 2017-09-25 19:11:59
放4度之前有否进行酶的灭活处理呢？如果处理了问题不大

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2楼2017-09-25 08:04:14
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-09-25 08:04:14
放4度之前有否进行酶的灭活处理呢？如果处理了问题不大

加了三氟乙酸，以终止蛋白酶的酶解反应，三氟乙酸的终浓度是0.2%
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3楼2017-09-25 19:13:20
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多肽纳米药物

新虫 (初入文坛)
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wuhao4850103: 金币+10 2017-09-27 13:37:19
引用回帖:
3楼: Originally posted by wuhao4850103 at 2017-09-25 19:13:20
加了三氟乙酸，以终止蛋白酶的酶解反应，三氟乙酸的终浓度是0.2%...

这种操作方法，会导致多肽本身降解非常快 ，保存的话 ，还是需要放在-20度 干粉保存
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4楼2017-09-27 10:11:56
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soarshining

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wuhao4850103: 金币+10 2017-10-09 15:38:09
不知道三氟乙酸这个浓度足够终止酶活性没。能直接90℃煮个5分钟吗，或者用变性剂之类的。另外是否无菌或者加了抑菌剂？这也可能影响结果，我纯蛋白有一次就意外的染菌经历。
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5楼2017-10-08 23:18:01
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by soarshining at 2017-10-08 23:18:01
不知道三氟乙酸这个浓度足够终止酶活性没。能直接90℃煮个5分钟吗，或者用变性剂之类的。另外是否无菌或者加了抑菌剂？这也可能影响结果，我纯蛋白有一次就意外的染菌经历。

没有加变性剂，也没有加抑菌剂。
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6楼2017-10-09 15:39:08
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soarshining

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引用回帖:
6楼: Originally posted by wuhao4850103 at 2017-10-09 15:39:08
没有加变性剂，也没有加抑菌剂。...

如果时间好几天的话出现细菌可能性还是比较大的
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7楼2017-10-09 21:54:07
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匿名

用户注销 (初入文坛)
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wuhao4850103: 金币+5 2018-01-27 22:25:00
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8楼2017-11-18 10:41:58
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wuhao4850103

银虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 三角近点 at 2017-11-18 10:41:58
你好，请问你用的酶和蛋白的量是多少

蛋白质与胰蛋白酶的质量比是50:1
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9楼2018-01-27 22:26:19
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yolo禾里

新虫 (初入文坛)
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wuhao4850103: 金币+5 2018-10-15 20:18:02
你好，请问你的脱盐步骤具体怎么操作的？

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10楼2018-07-27 00:48:57
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