24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
查看: 1176  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jinqianghu

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教大家,针对假单胞菌,蜡样芽孢杆菌以及志贺氏菌特异基因扩增不出来,求赐教!已有2人参与

请教各位同仁,针对假单胞菌基因PEA基因,蜡样芽孢杆菌cytK基因、志贺氏菌ipaH基因扩增不出来,咋回事?
我是利用细菌的纯培养,然后用公司试剂盒抽提细菌基因组,接着作传统的PCR,引物长度23bp,30bp都尝试过,就是出不来阳性结果,请大家帮忙分析以下原因,究竟是哪一步出了问题?是抽提基因组出了问题?还是PCR引物出了问题?抑或是别的原因,求赐教!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinqianghu

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by snoopytbw at 2017-09-27 15:54:37
全扩的话,可以这样,你设计引物为ORF最两端的序列,然后PCR产物直接做克隆去测序就好了,这样比较简单,否则很难测全长...

现在关键的问题,我设计的引物得不到PCR产物,跑电泳啥也没有,不知道问题究竟出在哪里?
9楼2017-09-27 16:52:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

liuhaolin3

至尊木虫 (著名写手)

你的实验有阳性对照吗?

发自小木虫Android客户端
2楼2017-09-21 19:49:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物太长,
IpaH-F1        TGGAAAAACTCAGTGCCTCT
IpaH-R1        CCAGTCCGTAAATTCATTCT
这个验证过了,可以用。浙大 文献里面的
用我的试试,另外一个我没有。。。
3楼2017-09-22 08:35:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinqianghu

铜虫 (小有名气)

谢谢同行的答复,liuhaolin3@我没有做阳性对照;snoopytbw@,我用你的引物分析了一下,你给的引物扩增产物大小大概是423bp,我想把ipaH全长阅读框1599全部PCR出来。不知道现在怎么办?
4楼2017-09-22 09:47:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见