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SherHolmes

新虫 (小有名气)

[交流] 有人用pBAD质粒做重组蛋白表达的吗?求大神 已有2人参与

用pBAD质粒做重组蛋白,,用的是阿拉伯糖诱导,终浓度2mg/mL,培养3h开始加阿拉伯糖,诱导4h,粗蛋白浓度还行,用咪唑过His柱,没有蛋白了,感觉蛋白没有挂柱子上一样,求大神指教

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18109408758

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
多少度诱导的,我的我一直感觉是没表达呢,我是OD到0.6-0.8加的称好的阿拉伯糖固体,25℃诱导10个小时,破碎感觉没表达,请问一下你的操作。

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2楼2019-06-26 15:47:07
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sangsandra

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 18109408758 at 2019-06-26 15:47:07
多少度诱导的,我的我一直感觉是没表达呢,我是OD到0.6-0.8加的称好的阿拉伯糖固体,25℃诱导10个小时,破碎感觉没表达,请问一下你的操作。

请问你后来用pBAD,蛋白表达了吗?
3楼2022-05-13 15:13:58
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sangsandra

金虫 (正式写手)

请问你在什么菌株中进行表达的?我用的TOP10一直没有表达
4楼2022-05-13 15:15:14
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