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longfeng

金虫 (小有名气)

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注册: 2006-01-17
性别: GG
专业: 微生物资源与分类学

[交流] 求：半定量PCR方法

那位大侠，给传一下半定量PCR的具体步骤，谢谢！
xueshui0393@163.com

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1楼 2009-02-15 13:44:22

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

BioEPI: 3
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虫号: 551611
注册: 2008-04-27
性别: GG
专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受

★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与！ 2-15 19:54

养细胞
提RNA，测浓度，调节每一组的浓度为一致
逆转录
PCR
电泳
搞定
最重要就是摸循环数
我习惯随便拿点细胞提RNA，测浓度，然后取1ul逆转录，然后PCR
PCR的时候，到达一定循环数拿出其中一管，其余继续跑，到下一个循环到，拿出多一管……依此类推，一般摸20、22、24……30个循环
找到能够看见条带的循环，然后以后做实验就用当量的RNA做实验，用这么多循环数

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2楼2009-02-15 16:16:36

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