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Klutzl

铁杆木虫 (职业作家)

小喵

[求助] 求助,大鼠皮肤石蜡切片

最近在做SD大鼠皮肤和肌肉的石蜡切片,实验步骤如下:
1、组织于40g/L多聚甲醛中固定过夜后,流水冲组织以去除固定液。
2、乙醇梯度脱水:70%,80%,90%乙醇脱水30min,95%,100%乙醇脱水20min,各两次;
3、透明:二甲苯:乙醇=1:1透明15min,二甲苯I透明15min,二甲苯II透明15min;
4、浸蜡:二甲苯:石蜡=1:1浸蜡20min,石蜡I浸蜡1h,石蜡II浸蜡1h,石蜡III浸蜡1h;
5、包埋后于4度冰箱保存
6、切片
出现的问题有:
1、在进行切片的时候,发现皮肤组织要么会碎,要么组织部分是空的,偶尔有皮肤组织是完整的,但是在水中铺展的时候发现皮肤组织会散开,想知道是什么原因造成的。
2、如何判断皮肤组织已经完全透明。
3、皮肤组织固定多长时间才比较合适
4、肌肉组织和皮肤组织的包埋步骤是一样的,但是肌肉组织的切片是没有问题,不知道是哪个步骤造成皮肤组织会破碎。
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苏哲然

新虫 (小有名气)

可能是没固定好 延长固定时间,另外,你的浸蜡时间太长了,一般浸蜡,两级就好,组织浸蜡时间过长,切片时候组织容易碎,浸蜡一级半小时,二级一个半小时你可以试试,我没切过皮肤,切的内脏

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古老而不可思议,深爱并异想天开
2楼2017-09-15 18:29:40
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Klutzl

铁杆木虫 (职业作家)

小喵

引用回帖:
2楼: Originally posted by 苏哲然 at 2017-09-15 18:29:40
可能是没固定好 延长固定时间,另外,你的浸蜡时间太长了,一般浸蜡,两级就好,组织浸蜡时间过长,切片时候组织容易碎,浸蜡一级半小时,二级一个半小时你可以试试,我没切过皮肤,切的内脏
...

皮肤固定时间不能超过24h,不然组织会变脆,按照这个方案,我之前做出来一次结果,可是后面几次就是到切片这块就不行了。现在也不知道是哪个步骤出问题……

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3楼2017-09-15 19:52:49
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东岚实验

新虫 (小有名气)

内容已删除
4楼2017-10-18 13:36:48
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不语春秋

禁虫 (小有名气)

nono2009: 屏蔽内容, 违规存档 2017-10-23 06:29:35
本帖内容被屏蔽

5楼2017-10-20 14:50:50
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我还想读书

新虫 (小有名气)

大神,小白弱弱的问一句皮肤该怎么纵向包埋呀

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6楼2017-12-02 17:02:00
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