| 查看: 397 | 回复: 4 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
dulei木虫 (小有名气)
|
[交流]
为什么Not 1 切不开？？？
|
||
|
我从大肠杆菌DH5a中提出质粒，用Not 1酶切（质粒上有这个酶切位点），怎么切都切不开，请大虾们分析一下我什么地方可能出错了。 序列特征如下： ……— Kpn I — TTTAAA — Not I — …… — Xba I — Not I — …… 序列为： ……GGTACCTTTAAAGCGGCCGC……TCTAGA GCGGCCGC…… 我想要第一个Not I和Xba I 之间的序列（也就是中间的省略号处，大约1300bp），而Xba I后边有个Not I，如果直接用Xba I和Not I双酶切，后边的Not I会影响Xba I的活性，所以，我先用Xba I单酶切，然后纯化酶切产物（电泳验证，和原来未切的质粒比较，条带正确，说明Xba I切开了），然后再用Not I 切，怎么切都切不开，电泳还是只有Xba I单酶切的那条条带。 我用Not I酶切体系： 10H buffer 1ul BSA 1ul tritionX-100 1ul 水 4.5ul 质粒 2ul Not I 0.5ul Not I限制性内切酶是宝生物的。 网上说Not I效率不高，也有人切不开过，不过都没有给出合理的解释。望高手给个解释。 |
回复此楼» 猜你喜欢
299求调剂
已经有3人回复
-
085600 英一数二272求调剂
已经有14人回复
-
高分子化学与物理调剂
已经有14人回复
-
289求调剂
已经有5人回复
-
材料085601调剂
已经有3人回复
-
环境调剂
已经有3人回复
-
一志愿东北大学化学314分求调剂
已经有3人回复
-
清华大学 材料与化工 353分求调剂
已经有5人回复
-
一志愿华中科技大学，化学专业344分，求调剂
已经有3人回复
-
289求调剂
已经有3人回复
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2009-02-12 20:07:34
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
3楼2009-02-12 20:09:31
4楼2009-02-13 15:04:39
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
5楼2009-02-13 21:57:27
30