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黑森林

金虫 (小有名气)

[交流] 关于RT-PCR求助

提了一次RNA,OD260/280在1.9-2.0之间;OD260在0.2-0.3;
反转录扩内参,12个样只有7个有,其他5个重新反转录还是没有p到内参。

想问问大家又没有碰到过类似的情况,怎么解决?

急!谢谢
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flylxd

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫研究PI

人既然不能选择生死,在这仅有一次生命里,活出自己最大的可能!
2楼2009-02-12 17:00:10
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黑森林

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by flylxd at 2009-2-12 17:00:
RNA降解?

跑电泳了,可以看见3条带
3楼2009-02-12 17:09:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

用的什么酶?
4楼2009-02-12 20:13:18
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bbyu007

木虫 (正式写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢帮助,欢迎常来~ 2-18 21:41
OD260在0.2-0.3? 是指OD260/OD230?如果是,OD260/OD230 应该>2.0  
现在你的结果说明RNA中含有大量盐离子,原因:最后几步的离心速度太大,离心时间太长。总感觉,你现在提取的RNA达不到做RT的标准,继续调整实验吧,加油!
我是笨笨鱼~~~
5楼2009-02-12 21:54:40
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢帮助,欢迎常来~ 2-18 21:42
用QIAGEN的试剂盒提吧,invitrogen 的 trizol提的量可以 但是纯度差点。 或者把二者结合起来也不错 我有把二者结合的protocol 如果你需要可以和我联系
6楼2009-02-14 07:00:13
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黑森林

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by bbyu007 at 2009-2-12 21:54:
OD260在0.2-0.3? 是指OD260/OD230?如果是,OD260/OD230 应该>2.0  
现在你的结果说明RNA中含有大量盐离子,原因:最后几步的离心速度太大,离心时间太长。总感觉,你现在提取的RNA达不到做RT的标准,继续调整 ...

OD260在0.2-0.3? 是指260的吸光值
不是OD260/OD230
7楼2009-02-18 14:30:27
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黑森林

金虫 (小有名气)

谢谢michaelwuqingyu

呵呵
8楼2009-02-18 14:31:13
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xiaohaozi9876

铁虫 (小有名气)

最近在学rt-pcr
Onceinamoment,wethinkoneselfgrowup,oneday,wefinallyfound...
9楼2009-02-18 21:37:47
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