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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于RT-PCR求助
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黑森林

金虫 (小有名气)

[交流] 关于RT-PCR求助

提了一次RNA，OD260/280在1.9-2.0之间；OD260在0.2-0.3；
反转录扩内参，12个样只有7个有，其他5个重新反转录还是没有p到内参。

想问问大家又没有碰到过类似的情况，怎么解决？

急！谢谢
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1楼 2009-02-12 16:26:27
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flylxd

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫研究PI
RNA降解？
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人既然不能选择生死，在这仅有一次生命里，活出自己最大的可能！
2楼2009-02-12 17:00:10
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黑森林

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by flylxd at 2009-2-12 17:00:
RNA降解？

跑电泳了，可以看见3条带
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3楼2009-02-12 17:09:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
用的什么酶？
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4楼2009-02-12 20:13:18
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bbyu007

木虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢帮助,欢迎常来~ 2-18 21:41
OD260在0.2-0.3? 是指OD260/OD230？如果是，OD260/OD230 应该>2.0  
现在你的结果说明RNA中含有大量盐离子，原因：最后几步的离心速度太大，离心时间太长。总感觉，你现在提取的RNA达不到做RT的标准，继续调整实验吧，加油！
赞一下(10人) 回复此楼
我是笨笨鱼~~~
5楼2009-02-12 21:54:40
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢帮助,欢迎常来~ 2-18 21:42
用QIAGEN的试剂盒提吧，invitrogen 的 trizol提的量可以 但是纯度差点。 或者把二者结合起来也不错 我有把二者结合的protocol 如果你需要可以和我联系
赞一下(10人) 回复此楼
6楼2009-02-14 07:00:13
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黑森林

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by bbyu007 at 2009-2-12 21:54:
OD260在0.2-0.3? 是指OD260/OD230？如果是，OD260/OD230 应该>2.0  
现在你的结果说明RNA中含有大量盐离子，原因：最后几步的离心速度太大，离心时间太长。总感觉，你现在提取的RNA达不到做RT的标准，继续调整 ...

OD260在0.2-0.3? 是指260的吸光值
不是OD260/OD230
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7楼2009-02-18 14:30:27
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黑森林

金虫 (小有名气)
谢谢michaelwuqingyu

呵呵
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8楼2009-02-18 14:31:13
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xiaohaozi9876

铁虫 (小有名气)
最近在学rt-pcr
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Onceinamoment,wethinkoneselfgrowup,oneday,wefinallyfound...
9楼2009-02-18 21:37:47
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