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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子

引用回帖:
7楼: Originally posted by ywwabc at 2017-08-31 16:22:47
1、        细胞密度转染时不要太多,如果转入的基因明显抑制增殖还好,如果影响不大的话70%就可以(还要看细胞的增长速度),毕竟你转染后细胞还是要增殖的,过了对数生长期,细胞表达能力就下降了
2、        实验载体与海肾荧 ...

1:感觉细胞密度大一点会抵抗转染试剂的毒性,铺板密度跟细胞状态相关,我铺24孔 密度是5*10 ^ 4 个。还是依据细胞状态与实验目的而定;
2:有pGL-4了  一个整合载体,挺好用;
4:我24孔 加2ul Lipo 2000  ,细胞死光光了都....miRNA 30pmol
5:很有道理!
6:很有道理!
麻辣王子不爱做实验
11楼2017-11-29 17:23:36
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子

之前印象中有人问载体共享的,小木虫的消息提醒功能不太完善;现在又找不到了。不过我们这里的载体是pGL3的 ;新款载体为pGL4 ; 可以求助pGL4的~~祝好!
麻辣王子不爱做实验
12楼2017-11-29 17:28:47
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zly19912002

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by zht930528 at 2017-11-29 17:19:57
谢谢回复!其中第三条:有做miRNA的话 mimics 与质粒得共转染啦;第五:如果铺板用了双抗,转染前用无抗无血清培养基或PBS洗一下,转染效率其实还可以~ 另外:Lipo 2000 如果储存不当,一定就不要用了...会把细胞都 ...

楼主您好,我最近在做这个实验,最后上机时老是没信号,不知道您遇到过这种情况吗?
随遇而安
13楼2017-12-20 19:37:26
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