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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 双荧光素酶报告实验，24孔板，质粒比例及总量，还有miRNA类似物共转染等问题
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
引用回帖:
7楼: Originally posted by ywwabc at 2017-08-31 16:22:47
1、        细胞密度转染时不要太多，如果转入的基因明显抑制增殖还好，如果影响不大的话70%就可以（还要看细胞的增长速度），毕竟你转染后细胞还是要增殖的，过了对数生长期，细胞表达能力就下降了
2、        实验载体与海肾荧 ...

1：感觉细胞密度大一点会抵抗转染试剂的毒性，铺板密度跟细胞状态相关，我铺24孔 密度是5*10 ^ 4 个。还是依据细胞状态与实验目的而定；
2：有pGL-4了  一个整合载体，挺好用；
4：我24孔 加2ul Lipo 2000  ，细胞死光光了都....miRNA 30pmol
5：很有道理！
6：很有道理！
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麻辣王子不爱做实验
11楼2017-11-29 17:23:36
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
之前印象中有人问载体共享的，小木虫的消息提醒功能不太完善；现在又找不到了。不过我们这里的载体是pGL3的 ；新款载体为pGL4 ； 可以求助pGL4的~~祝好！
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麻辣王子不爱做实验
12楼2017-11-29 17:28:47
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zly19912002

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zht930528 at 2017-11-29 17:19:57
谢谢回复！其中第三条：有做miRNA的话 mimics 与质粒得共转染啦；第五：如果铺板用了双抗，转染前用无抗无血清培养基或PBS洗一下，转染效率其实还可以~ 另外：Lipo 2000 如果储存不当，一定就不要用了...会把细胞都 ...

楼主您好，我最近在做这个实验，最后上机时老是没信号，不知道您遇到过这种情况吗？
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随遇而安
13楼2017-12-20 19:37:26
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