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大神救救我

铁虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌只长菌体,不产蛋白该怎么办 已有3人参与

向各位大神请教一个问题:我从小摇瓶中将大肠杆菌接到四个2L的大摇瓶中,在OD1.0左右,加入IPTG诱导,诱导量为千分之二。10小时后收菌,一瓶的OD为1.8,其余3瓶的OD都在7左右。但是我上蛋白纯化仪收蛋白时只有那瓶OD为1.8的菌有我们要的蛋白。
现在分析可能是其余的菌将培养基消耗产菌体去了。我想问你一下能不能控制什么实验条件,使得大肠产蛋白呀!

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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
培养基是什么?诱导时间提前些看看,比如OD=0.5时。
2楼2017-08-30 14:50:33
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cod19852008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
加抗生素了不?质粒丢失吧,丢失质粒的就长的快,不受诱导影响
3楼2017-08-30 16:22:49
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少女天空

新虫 (初入文坛)

4楼2017-08-30 17:12:22
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水逝雁南飞

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换条件吧,比如诱导温度什么之类的,多试几个条件

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5楼2017-08-30 20:31:45
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水逝雁南飞

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换条件吧,比如诱导温度什么之类的,多试几个条件

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6楼2017-08-30 20:31:47
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大神救救我

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xuweitao at 2017-08-30 14:50:33
培养基是什么?诱导时间提前些看看,比如OD=0.5时。

培养基就是普通的LB培养基,昨天一瓶OD0.4时诱导,一瓶在1.1诱导。今天收菌时OD都在10左右。

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7楼2017-08-31 09:25:29
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大神救救我

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cod19852008 at 2017-08-30 16:22:49
加抗生素了不?质粒丢失吧,丢失质粒的就长的快,不受诱导影响

抗生素加了。如果质粒丢失了不应该只有一瓶产蛋白,另外三瓶不产,毕竟都是从一个小摇瓶接的。不过我们打算重新提质粒了,进行转化了。

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8楼2017-08-31 09:28:25
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