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细胞分离你知多少？老司机带你一窥究竟
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细胞分离是指将组织分散制成细胞悬液后从中获取目的细胞的过程。细胞纯化更进一步强调从原代培养前成分混杂的异质性细胞悬液中或者从培养物中获得单一类型细胞的过程。 分离和纯化细胞的过程不仅仅在原代培养之前进行的，有时分离和纯化细胞的过程还贯穿于原代培养和继代培养的过程中，甚至是主要依赖培养过程实现分离和纯化细胞的目的。 细胞分离纯化的方法有密度梯度离心技术、逆流淘析分离技术、利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法等。 ★ 密度梯度离心技术 ☞ 原理：密度梯度离心法是使待分离样品在密度梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，最终分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法，又称区带离心。密度梯度离心不仅可依据样品颗粒的重量及沉降系数进行分离，还可根据样品颗粒的密度、形状等特征进行分离。 ☞ 使用方法：密度梯度离心在整个离心过程中只使用一种转速，中途无需变更实验参数，而差速离心则需要进行调整转速、重悬反复离心等操作。密度梯度离心适宜分离密度有一定差异的样品，而差速离心则适用于分离混合样品中各沉降系数差别较大的组分。 ☞ 优点： 分离效果好、适应范围广、 对温度变化及加减速引起的扰动不敏感。 ☞ 缺点：离心时间长、需制备密度梯度介质溶液、对操作者的技能要求较高。 ☞划分：根据梯度介质的浓度及颗粒在其中沉降的行为，密度梯度离心又分为：速度区带离心、等密度梯度离心！ ★ 逆流淘析分离技术 ☞ 简述：通过含细胞介质溶液的流力和浮力与细胞所受离心力之间相互作用而分离细胞的一种技术。 ☞ 原理：细胞置于一特殊的离心室中，离心室成锥形状，其定点指向沉降方向，细胞悬浮于以向心方向连续流动的介质溶液中，同时受到离心力的作用。当向外的离心力于内向的流立即浮力达到平衡时，每个细胞将按照它的的沉降速率达到其平衡位置。 ☞ 常用于：进一步分离淋巴细胞和单核细胞。 ★ 选择性细胞凝集 ☞ 简述：羟乙基淀粉和甲级纤维素可以使红细胞形成大的“钱串”，加速其沉降，从而比其他细胞更快地从造血细胞悬液中沉降出去。 ☞ 常用于：这一方法通常用于快速去除大量成熟红细胞，而不会对有核细胞群造成太大的损失。但是，与上面提到的密度梯度离心和逆流淘析步骤一样，这一方法并没有使干细胞群相对于有核细胞发生太多的富集。 ★ 基于不同粘附特性的细胞分离方法 ☞ 简述：粘附于某些固相物质如玻璃或塑料的表面，使某些类型细胞的基本生物学特性之一，但另一些细胞却缺乏这种能力；或某些细胞的粘附能力强，粘附作用快，而某些细胞的粘附能力弱或粘附作用慢。根据这些差异，可以分离或消除某些类型的细胞。这种将粘附较快的细胞与粘附较慢的细胞（货物粘附能力）的细胞分离开来并分别收集的处理过程就称为差粘附处理。 ☞ 常用于：分离细胞悬液中的成纤维细胞与其它组织细胞。 ★ 利用细胞表面标志分离纯化细胞的方法 1、免疫溶解法 ☞ 原理：当补体存在时，用抗细胞某一表面标志的特异性抗体与异质性细胞一起孵育，可以是具有该特异性表面标志的细胞溶解。利用这一原理，将消除细胞的特异性表面标志的抗体和补体加入细胞培养物中，使抗体及补体作用于具有相应抗原的细胞并溶解之，而对该抗原阴性的细胞进行富集。 ☞ 适用于：细胞悬液或细胞培养物中待消除细胞数量不是很大的情况。 2、流式细胞分选术 ☞ 简述：利用一个或数个荧光基团标记的抗体与细胞孵育以进行标记，标记好的细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正、负不同的电荷，当液滴流经过带有几千伏的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，没有充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。 3、免疫磁珠分选技术 ☞ 简述：此方法是高效简捷的免疫细胞及其它细胞的分离纯化方法。原理是已包被一抗的磁珠与细胞表面相应分子特异性结合，或者已包被二抗的磁珠与预先已与细胞表面分子特异结合的一抗结合。磁珠携带与之结合的细胞吸附于分离柱/试管上，实现阳性细胞分离或阴性细胞的分离。 |
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