| 查看: 1370 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
嗜酸乳杆菌基因敲除的问题
|
||
|
我现在将构建好的携带氯霉素抗性基因的敲除载体PNZ5319-luxS电转化导入噬酸菌后，在含氯霉素抗性的MRS平板中有菌落长出，就进行了提全基因组后PCR验证，p上游同源臂和下游同源臂。 我的问题是??1.现在状态的菌长的很慢，长3，4天也不会很浓，所以提出的全基因组条带也不是很亮? ?2.进行PCR，P出了在上下游位置的条带，但是都不亮，所以无法送去测序，而且pcr结果都很不稳定，很多时候P不出来。但是因为之前有P到，感觉这个基因是已经敲掉的，所以我不想放弃，因为之前电转化也做了好几个月，才有菌长出来的。我做这个实验还是小白，所以请各位帮帮忙分析一下，不胜感激！ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有109人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
zbd1990
木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 10398.3
- 红花: 16
- 帖子: 835
- 在线: 63.2小时
- 虫号: 1472055
- 注册: 2011-11-02
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
|
一般情况添加抗生素主要是为了防止质粒丢失，所以理论上对已经有抗性的菌株不加抗生素并不会影响基因组DNA的提取。 发自小木虫Android客户端 |
皮皮彤5楼2017-08-25 17:27:24
zbd1990
木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 10398.3
- 红花: 16
- 帖子: 835
- 在线: 63.2小时
- 虫号: 1472055
- 注册: 2011-11-02
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
2楼2017-08-25 08:36:02
3楼2017-08-25 10:24:25
zbd1990
木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 10398.3
- 红花: 16
- 帖子: 835
- 在线: 63.2小时
- 虫号: 1472055
- 注册: 2011-11-02
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
|
菌对氯霉素的耐受性普遍都不是很好，我以前做的大概添加浓度只有1-2.5微克每毫升，建议你做一个不加氯霉素的当对照，看看是不是氯霉素浓度过高引起的菌生长不好。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-08-25 17:25:05
