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汕头大学海洋科学接受调剂
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皮皮彤

新虫 (初入文坛)

[求助] 嗜酸乳杆菌基因敲除的问题

我现在将构建好的携带氯霉素抗性基因的敲除载体PNZ5319-luxS电转化导入噬酸菌后,在含氯霉素抗性的MRS平板中有菌落长出,就进行了提全基因组后PCR验证,p上游同源臂和下游同源臂。
      我的问题是??1.现在状态的菌长的很慢,长3,4天也不会很浓,所以提出的全基因组条带也不是很亮? ?2.进行PCR,P出了在上下游位置的条带,但是都不亮,所以无法送去测序,而且pcr结果都很不稳定,很多时候P不出来。但是因为之前有P到,感觉这个基因是已经敲掉的,所以我不想放弃,因为之前电转化也做了好几个月,才有菌长出来的。我做这个实验还是小白,所以请各位帮帮忙分析一下,不胜感激!

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zbd1990

木虫 (正式写手)

菌对氯霉素的耐受性普遍都不是很好,我以前做的大概添加浓度只有1-2.5微克每毫升,建议你做一个不加氯霉素的当对照,看看是不是氯霉素浓度过高引起的菌生长不好。

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4楼2017-08-25 17:25:05
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zbd1990

木虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-25 11:55:20
菌长的不浓就多接几瓶摇瓶,并考虑降低氯霉素浓度,看看菌会不会长的更好一些。

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2楼2017-08-25 08:36:02
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皮皮彤

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zbd1990 at 2017-08-25 08:36:02
菌长的不浓就多接几瓶摇瓶,并考虑降低氯霉素浓度,看看菌会不会长的更好一些。

氯霉素浓度之前是10微克每毫升,已经降到5微克每毫升,还是不行啊

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3楼2017-08-25 10:24:25
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zbd1990

木虫 (正式写手)

一般情况添加抗生素主要是为了防止质粒丢失,所以理论上对已经有抗性的菌株不加抗生素并不会影响基因组DNA的提取。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2017-08-25 17:27:24
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