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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 离子交换层析遇到麻烦
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自带光环?

新虫 (初入文坛)

[交流] 离子交换层析遇到麻烦 已有3人参与

过阴离子交换柱，缓冲液用的20mM的tris-hcl和1M的Macl，PH均为8.0。过柱子的时候先用tris平衡，结果目的蛋白流出来了，后面用Macl洗脱的时候，没有目的蛋白。
样品是发酵产物并硫酸铵沉淀后冷冻干燥来的，等电点不清楚。但是缓冲液PH7的时候溶解度特别小。
这是目的蛋白没挂柱对吧？我要怎么样才能让蛋白挂柱

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1楼 2017-08-25 08:16:22
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
盐浓度太高导致不挂柱子，盐析冻干的样品最好也除盐

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I am not a hero , but I served with heroes！
2楼2017-08-25 08:22:41
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自带光环?

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wlt728 at 2017-08-25 08:22:41
盐浓度太高导致不挂柱子，盐析冻干的样品最好也除盐

是脱完盐再进行冷冻干燥的

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3楼2017-08-25 08:54:58
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家
★
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pH8.0不挂柱，说明pI大于或等于8.0。考虑你的蛋白pH7.0溶解度小，那么建议你先把缓冲液的pH调整到9.0~9.5试试，弱依然不挂住。再考虑其他的层析手段。
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4楼2017-08-25 09:07:12
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自带光环?

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by walking dead at 2017-08-25 09:07:12
pH8.0不挂柱，说明pI大于或等于8.0。考虑你的蛋白pH7.0溶解度小，那么建议你先把缓冲液的pH调整到9.0~9.5试试，弱依然不挂住。再考虑其他的层析手段。

嗯，我试一下，谢谢啦

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5楼2017-08-25 09:31:17
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
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蛋白没挂柱，硫酸氨盐析的样品可以尝试溶解后直接疏水层析，加油。
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6楼2017-10-31 15:39:55
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