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关于重叠pcr 有一些问题 已有2人参与
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重叠pcr的引物方面，第一个基因的下游引物和第二个基因的上游引物，不都包含另一个片段的一小部分，那么如果我要融合的这两个基因片段是在同一个基因组上，那么如何保证，他们各自的特异结合呢，是靠长度吗。如果靠长度的话，那么同一个片段的上下游引物，退火温度差太多，该怎么选择呢？？ 发自小木虫Android客户端 |
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送红花一朵 |
您好，您一般做，退火温度都是平均Tm值家2℃？ 就比如一个是60，一个是66。您的退火温度是63？ 另外，我用的是primerStar这种酶。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-08-24 13:05:07
snoopytbw
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2楼2017-08-24 08:52:06
snoopytbw
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3楼2017-08-24 08:53:52
送红花一朵 |
不对，写错了。上面那个例子，您的退火温度是65？ 另外，在请问一下，这个体系的问题。我用这个PrimerStar的酶，50ul体系分别扩增出来两个目的片段，胶回收产物之后，先不加引物，把这两个片段混合扩增8-10个循环，这时候，加入的片段含量和其他原料含量应该是多少，用多少的体系。 再接下来的拼接体系，就直接加入两个引物片段就可以？？ 发自小木虫Android客户端 |
5楼2017-08-24 13:50:37