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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » [杂带比目的条带还亮，该怎么优化PCR条件(目的条带,杂带,条带)]
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学生孔

新虫 (小有名气)

[交流] [杂带比目的条带还亮，该怎么优化PCR条件(目的条带,杂带,条带)]

[杂带比目的条带还亮，该怎么优化PCR条件(目的条带,杂带,条带)] 我做批PCR ，跑出的条带杂带比目的条带还亮，并且分子量比目的片段还大，各位帮分析一下是什么原因，有什么好办法处理优化一下PCR条件

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1楼 2017-08-20 09:57:09
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再见江湖

铁虫 (小有名气)
换引物吧！

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2楼2017-08-20 10:13:58
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芯随风静

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by 学生孔 at 2017-08-20 09:57:09
我做批PCR ，跑出的条带杂带比目的条带还亮，并且分子量比目的片段还大，各位帮分析一下是什么原因，有什么好办法处理优化一下PCR条件
...

有可能延伸时间太长了，导致扩出非特异性条带。也有可能引物特异性不好导致的。

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3楼2017-08-20 12:19:12
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学生孔

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 芯随风静 at 2017-08-20 12:19:12
有可能延伸时间太长了，导致扩出非特异性条带。也有可能引物特异性不好导致的。
...

好的，那我缩短延伸时间试一下

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4楼2017-08-20 13:42:21
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学生孔

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 再见江湖 at 2017-08-20 10:13:58
换引物吧！

有的样品能扩增出单一条带，有的就有杂带，引物是通用引物

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5楼2017-08-20 13:44:23
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江灵敏

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以梯度找找退过温度看看

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6楼2017-08-20 15:56:38
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gengxin60
7楼2017-08-20 17:34:01
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学生孔

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 江灵敏 at 2017-08-20 15:56:38
可以梯度找找退过温度看看

退火温度做过梯度了，找到最适合温度，前一批样品能跑出单一条带，这次换了样品就出了杂带，还比目的条带亮

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8楼2017-08-20 18:41:27
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周大神

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 学生孔 at 2017-08-20 18:41:27
退火温度做过梯度了，找到最适合温度，前一批样品能跑出单一条带，这次换了样品就出了杂带，还比目的条带亮
...

说明你的引物特异性不够好，不过一般通用性引物本身就存在这种问题，也可以说这个引物不适合你现在做的这个样品，因为这个样品DNA中有一段更适合这个引物的基因片段，刚好可以扩增出来，你换别的样品再试一下呗！祝好运！
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面对阳光，努力生长
9楼2017-08-23 11:55:52
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