24小时热门版块排行榜    

查看: 1824  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

学生孔

新虫 (小有名气)

[交流] [杂带比目的条带还亮,该怎么优化PCR条件(目的条带,杂带,条带)]

[杂带比目的条带还亮,该怎么优化PCR条件(目的条带,杂带,条带)] 我做批PCR ,跑出的条带杂带比目的条带还亮,并且分子量比目的片段还大,各位帮分析一下是什么原因,有什么好办法处理优化一下PCR条件

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周大神

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 学生孔 at 2017-08-20 18:41:27
退火温度做过梯度了,找到最适合温度,前一批样品能跑出单一条带,这次换了样品就出了杂带,还比目的条带亮
...

说明你的引物特异性不够好,不过一般通用性引物本身就存在这种问题,也可以说这个引物不适合你现在做的这个样品,因为这个样品DNA中有一段更适合这个引物的基因片段,刚好可以扩增出来,你换别的样品再试一下呗!祝好运!
面对阳光,努力生长
9楼2017-08-23 11:55:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

再见江湖

铁虫 (小有名气)

2楼2017-08-20 10:13:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芯随风静

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by 学生孔 at 2017-08-20 09:57:09
我做批PCR ,跑出的条带杂带比目的条带还亮,并且分子量比目的片段还大,各位帮分析一下是什么原因,有什么好办法处理优化一下PCR条件
...

有可能延伸时间太长了,导致扩出非特异性条带。也有可能引物特异性不好导致的。

发自小木虫Android客户端
3楼2017-08-20 12:19:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学生孔

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 芯随风静 at 2017-08-20 12:19:12
有可能延伸时间太长了,导致扩出非特异性条带。也有可能引物特异性不好导致的。
...

好的,那我缩短延伸时间试一下

发自小木虫Android客户端
4楼2017-08-20 13:42:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见