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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)

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虫号: 4908383
注册: 2016-08-10
专业: 生物化学

[求助] 阳离子柱（CM）层析过程洗脱阶段的问题已有2人参与

蛋白质实验过程中，弱阳离子柱层析时，一直都是以40%的梯度洗脱收集目的蛋白的，但是一次洗脱过程中，蛋白质在此梯度没有洗脱下来，最后用100%高盐才洗脱下来，请问大家产生这种现象的原因可以从哪些方面来分析？

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1楼 2017-08-18 13:59:54

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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

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性别: GG
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

首先说一下吸附和洗脱的过程：低盐吸附，高盐洗脱，洗脱是缓冲液离子竞争取代蛋白质的结合位点，需要比蛋白质的电荷浓度大，才能解吸蛋白。你的洗脱需要更高盐浓度是因为吸附较强。同样的盐浓度洗脱现象不一样，一是跟你的蛋白样品情况有关系，样品处理结果与之前不同（含盐量），以及蛋白质缓冲液的pH不同，会导致蛋白质带电荷强度不一样，吸附强度会有不同，自然洗脱的盐浓度也会不同；还有CM弱阴离子交换介质洗脱时对pH比较敏感，同一盐浓度（电导）的洗脱液pH不同，洗脱情况也是不同的。所以要综合考虑样品、缓冲液盐浓度、pH等。