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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)

[求助] 阳离子柱(CM)层析过程洗脱阶段的问题 已有2人参与

蛋白质实验过程中,弱阳离子柱层析时,一直都是以40%的梯度洗脱收集目的蛋白的,但是一次洗脱过程中,蛋白质在此梯度没有洗脱下来,最后用100%高盐才洗脱下来,请问大家产生这种现象的原因可以从哪些方面来分析?
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
以电导为依据去判断洗脱条件的一致性
还有柱填料的非特异性洗脱,用时间长要了要清洗处理的。
2楼2017-08-20 19:48:31
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


【答案】应助回帖

首先说一下吸附和洗脱的过程:低盐吸附,高盐洗脱,洗脱是缓冲液离子竞争取代蛋白质的结合位点,需要比蛋白质的电荷浓度大,才能解吸蛋白。你的洗脱需要更高盐浓度是因为吸附较强。同样的盐浓度洗脱现象不一样,一是跟你的蛋白样品情况有关系,样品处理结果与之前不同(含盐量),以及蛋白质缓冲液的pH不同,会导致蛋白质带电荷强度不一样,吸附强度会有不同,自然洗脱的盐浓度也会不同;还有CM弱阴离子交换介质洗脱时对pH比较敏感,同一盐浓度(电导)的洗脱液pH不同,洗脱情况也是不同的。所以要综合考虑样品、缓冲液盐浓度、pH等。
3楼2017-08-22 10:13:22
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