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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zhoubin0823

木虫 (小有名气)

[求助] 单链DNA可以做分子克隆吗? 已有2人参与

同事有一段合成的单链DNA,其领导让她克隆到T载体上上,而同事反复问领导单链DNA是否可以克隆到T载体上,领导说可以,然后同事试了发现测序后均没是自连,并没有连上去,我以前也没听说过单链DNA可以克隆到T载体上,请问有大神了解这方面的情况吗?是要进行特殊处理吗?此领导不好仔细去问,所以发帖求助下。
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落雪6

铁杆木虫 (正式写手)

小兵

2楼2017-08-18 12:39:13
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gufeng2008

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
好像可以,以前做过这块,印象中连接酶有缺刻可以自动修复,
3楼2017-08-18 16:58:19
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zhoubin0823

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gufeng2008 at 2017-08-18 16:58:19
好像可以,以前做过这块,印象中连接酶有缺刻可以自动修复,

感谢回复,还想问一下,连接完后是这一段单链,还是说已经是双链,只是不匹配,需要连接酶来修复?
4楼2017-08-18 17:29:51
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18253592055

金虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-21 11:59:02
我觉得单链的东西怎么可能连到一个双链的东西上,我们之前做单链DNA都是定一个正向一个反向,在一定的条件下形成双链,再进行酶切连接。还有一个问题,你的本身就是单链DNA,一般连t载需要带有A尾,确认一下,希望可以帮到你

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-08-19 12:21:17
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18253592055

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhoubin0823 at 2017-08-18 17:29:51
感谢回复,还想问一下,连接完后是这一段单链,还是说已经是双链,只是不匹配,需要连接酶来修复?...

没有原料怎么修复

发自小木虫IOS客户端
6楼2017-08-19 12:45:06
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

连不上去。 连接酶需要双链.
7楼2017-08-19 17:05:50
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8楼2017-08-21 06:41:15
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magicbard

铁杆木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
单链用普通的酶切连接是不行的,设计引物PCR可以变成双链再连进去。
如果非要直接连接的话,用NEB的NEBuilder DNA Assembly Cloning Kit可以直接克隆进去,不过比较贵。
9楼2017-08-21 08:31:57
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