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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 单链DNA可以做分子克隆吗？
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zhoubin0823

木虫 (小有名气)

[求助] 单链DNA可以做分子克隆吗？ 已有2人参与

同事有一段合成的单链DNA，其领导让她克隆到T载体上上，而同事反复问领导单链DNA是否可以克隆到T载体上，领导说可以，然后同事试了发现测序后均没是自连，并没有连上去，我以前也没听说过单链DNA可以克隆到T载体上，请问有大神了解这方面的情况吗？是要进行特殊处理吗？此领导不好仔细去问，所以发帖求助下。
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1楼 2017-08-18 12:35:17
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落雪6

铁杆木虫 (正式写手)

小兵
连接体系有问题吧？

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2楼2017-08-18 12:39:13
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gufeng2008

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
好像可以，以前做过这块，印象中连接酶有缺刻可以自动修复，
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3楼2017-08-18 16:58:19
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zhoubin0823

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gufeng2008 at 2017-08-18 16:58:19
好像可以，以前做过这块，印象中连接酶有缺刻可以自动修复，

感谢回复，还想问一下，连接完后是这一段单链，还是说已经是双链，只是不匹配，需要连接酶来修复？
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4楼2017-08-18 17:29:51
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18253592055

金虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-21 11:59:02
我觉得单链的东西怎么可能连到一个双链的东西上，我们之前做单链DNA都是定一个正向一个反向，在一定的条件下形成双链，再进行酶切连接。还有一个问题，你的本身就是单链DNA，一般连t载需要带有A尾，确认一下，希望可以帮到你

发自小木虫IOS客户端
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5楼2017-08-19 12:21:17
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18253592055

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhoubin0823 at 2017-08-18 17:29:51
感谢回复，还想问一下，连接完后是这一段单链，还是说已经是双链，只是不匹配，需要连接酶来修复？...

没有原料怎么修复

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6楼2017-08-19 12:45:06
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bullfrog325

木虫 (正式写手)
连不上去。 连接酶需要双链.
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7楼2017-08-19 17:05:50
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pcduak57
8楼2017-08-21 06:41:15
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magicbard

铁杆木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
单链用普通的酶切连接是不行的，设计引物PCR可以变成双链再连进去。
如果非要直接连接的话，用NEB的NEBuilder DNA Assembly Cloning Kit可以直接克隆进去，不过比较贵。
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9楼2017-08-21 08:31:57
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