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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » CsCl密度梯度离心纯化质粒DNA
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Sthunder

木虫 (正式写手)

[求助] CsCl密度梯度离心纯化质粒DNA 已有1人参与

大家好！ 有没有人做过CsCl密度梯度离心纯化质粒DNA的啊？我用 1g/ml的CsCL浓度，13.5 ml quick seal tube, 50TI rotor, 35 000rpm 60 h 离心后发现条带跑到离心管的底部，上面有很小的一条开环，线性DNA条带，而且两带非常靠近。 将下面大的条带（已经在离心管底部）抽出后跑胶发现其中包含质粒DNA（三种形态都有）还有大量的RNA。也就是说各成分并没有完全分离。

如有经验丰富的大神还望多多指教如何才能获取高纯度DNA。 万分感谢！！
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互助互励，共奋共进！！
1楼 2017-08-16 21:56:27
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echo-lee520

木虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-09-04 22:56:48
分子克隆有详细的protocol，1g质粒溶液加1.01gCsCL, 5g质粒原液加100μl 10mg/ml EB, 管底的应该主要是RNA, 一般超螺旋的带是较粗的，在线性或开环的下面，具体分离效果情况依据，总质粒量，离心管管径决定。type 50Ti建议45000r/min 48h
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2楼2017-08-17 09:36:09
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gqfknd00
3楼2017-08-17 15:09:39
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xyfqc954
4楼2017-08-17 20:20:31
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gqfknd00
5楼2017-08-17 21:08:07
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echo-lee520

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

分子克隆有详细的protocol，1g质粒溶液加1.01gCsCL, 5g质粒原液加100μl 10mg/ml EB, 管底的应该主要是RNA, 一般超螺旋的带是较粗的，在线性或开环的下面，具体分离效果情况依据，总质粒量，离心管管径决定。type 50Ti建议45000r/min 48h
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6楼2017-09-04 21:24:11
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ssykl

铁虫 (正式写手)
您好，可否问一下您使用的CsCl是从哪个公司购买的，是什么纯度？需要灭菌吗？我自己也是新手做病毒纯化，什么都搞不清楚！非常谢谢您
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7楼2018-04-17 11:28:24
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