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Sthunder

木虫 (正式写手)

[求助] CsCl密度梯度离心纯化质粒DNA 已有1人参与

大家好! 有没有人做过CsCl密度梯度离心纯化质粒DNA的啊?我用 1g/ml的CsCL浓度,13.5 ml quick seal tube, 50TI rotor, 35 000rpm 60 h 离心后发现条带跑到离心管的底部,上面有很小的一条开环,线性DNA条带,而且两带非常靠近。 将下面大的条带(已经在离心管底部)抽出后跑胶发现其中包含质粒DNA(三种形态都有)还有大量的RNA。也就是说各成分并没有完全分离。

如有经验丰富的大神还望多多指教如何才能获取高纯度DNA。 万分感谢!!
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互助互励,共奋共进!!
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echo-lee520

木虫 (小有名气)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-09-04 22:56:48
分子克隆有详细的protocol,1g质粒溶液加1.01gCsCL, 5g质粒原液加100μl 10mg/ml EB, 管底的应该主要是RNA, 一般超螺旋的带是较粗的,在线性或开环的下面,具体分离效果情况依据,总质粒量,离心管管径决定。type 50Ti建议45000r/min 48h
2楼2017-08-17 09:36:09
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3楼2017-08-17 15:09:39
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4楼2017-08-17 20:20:31
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5楼2017-08-17 21:08:07
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echo-lee520

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

分子克隆有详细的protocol,1g质粒溶液加1.01gCsCL, 5g质粒原液加100μl 10mg/ml EB, 管底的应该主要是RNA, 一般超螺旋的带是较粗的,在线性或开环的下面,具体分离效果情况依据,总质粒量,离心管管径决定。type 50Ti建议45000r/min 48h
6楼2017-09-04 21:24:11
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ssykl

铁虫 (正式写手)

您好,可否问一下您使用的CsCl是从哪个公司购买的,是什么纯度?需要灭菌吗?我自己也是新手做病毒纯化,什么都搞不清楚!非常谢谢您
7楼2018-04-17 11:28:24
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