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对基因片段测序结果表示不解，求大神指导 已有1人参与
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我对炭疽属真菌的CHS（编号D）、TUB2（编号E）、CAL（编号F）三个基因片段分别进行了PCR扩增，并送公司测序。但是对测序结果表示很不理解，问题如图中标注： http://![\"对基因片段测序结果表示不解，求大神指导\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2017/0814/bw140h2214233_1502700498_888.jpg#opennewwindow\") http://![\"对基因片段测序结果表示不解，求大神指导-1\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2017/0814/bw140h2214233_1502700549_451.jpg#opennewwindow\") 问题说明 【1】图1中，样品D3、D5、D7、D11在胶图中显示为清晰的单一条带，但测序结果全部为“正向双峰”，请问造成这种结果的原因会有哪些？胶图显示为单一条带，但是测序结果为“正向双峰”，但是反向正常，这种现象是什么原因呢？ 【2】图2中样品E4、E2、E6、E10、E11在胶图中显示为清晰的单一条带，但测序结果全部为“反向双峰”，但正向是正常的。请问这是什么原因呢？ 样品E9、E5、E7、E8条带清晰，但是结果为“双峰无条带，无法回收”，样品F2、F5也有清晰条带，测序结果为“信号弱\无信号”，请问造成上述结果的原因是什么呢？ |
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8楼2017-08-14 21:18:31
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
米夏girl: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-08-14 20:45:27
感谢参与，应助指数 +1
米夏girl: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-08-14 20:45:27
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可能情况1： 重复序列，如polyT、polyA或几个碱基重复 解决办法： 用反向引物测互补链。 可能情况2： 质粒测序在插入序列中出现套峰 解决办法： 可能是样品非单克隆，挑其他测序。 可能情况3： PCR产物测序中，某一点后序列变乱 解决办法： 可能是存在移码突变，这是正常的，也可以后测序。 可能情况4： PCR产物中一个或多个位置有套峰 解决办法： 序列中存在突变，这是正常的，也可以后进行测序。 可能情况5： PCR产物测序前部分双峰 解决办法： 引物二聚体污染或产物不纯，后测序。 可能情况6： 质粒和PCR产物测序出现双峰 解决办法： 引物不纯，测序时只要单一引物，请不要将双向PCR引物混合；合成的引物没有纯化，或纯化不好。重新合成引物测序。 如图中标注，没有看到你的图啊！ |
2楼2017-08-14 19:29:59
受教了！ 3楼2017-08-14 20:32:24
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不好意思，这个帖子可能因为网络的问题，图片显示不出来了。我重新发了一个帖子，这是帖子的链接http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=11592511&target=1 里面补充了图片。谢谢您。 |
4楼2017-08-14 20:45:06