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18699725315

新虫 (初入文坛)

[求助] 土壤DNA提取 已有2人参与

土壤微生物如果是保存原因,导致土壤DNA提取含量较低,条带不清楚,能否采用培养基定向分类培养,扩大微生物数量的方法进行后再提取土壤的DNA呀,还是应该怎么处理?求这方面的专家给出见解,不甚感激

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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖


小冀-: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2017-08-16 09:42:49
培养后,菌群结构显著改变了,大量的优势菌把其他微生物全盖掉了。。肯定不行的。建议用专业的土壤DNA提取试剂盒,好像是罗氏的,有点贵,且操作很繁琐,优点是效率很高,提DNA很浓。自己查下好了。
2楼2017-08-16 08:53:28
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Only菱花

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

3楼2017-08-16 09:01:55
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zhsmxfx

金虫 (小有名气)

4楼2017-08-16 09:19:00
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微基生物

捐助贵宾 (小有名气)

技术专员

引用回帖:
3楼: Originally posted by Only菱花 at 2017-08-16 09:01:55
怎么土壤也有DNA的吗?把我看糊涂了,看来孤陋寡闻了……

土壤里面有微生物,微生物有DNA。
专注微生物多样性分析QQ2758452825
5楼2017-08-21 17:18:00
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微基生物

捐助贵宾 (小有名气)

技术专员

【答案】应助回帖

如果是由于样本保存的原因,条带如果有拖尾的话,说明里面DNA已经降解了。(不过在现实中,及时是不放到-20或-80保存,土壤中应该也有微生物存在,特别是细菌的)。看你做什么了,如果做细菌,那么可以用16S的一段如(V3-V4)或(V4-V5),对抽提的DNA进行扩增,看看是否能扩出来。在我们公司的实际操作中,有时候土壤总DNA提的效果不好,但是16S的一段却扩的很好,如果这个扩的很好,也是也可以用的。你可以试一下。还有,也有可能是提取试剂盒的原因,你可以用一下天根的土壤DNA抽提试剂盒,效果不错的。建议不要用培养基定性培养,因为会改变里面微生物的群落结构。
如果真的是保存原因,那就只能重新取样了。
专注微生物多样性分析QQ2758452825
6楼2017-08-21 17:22:03
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学爱临风

铁虫 (初入文坛)

土壤中含有大量的腐殖酸等酸类物质,对提取DNA有很大的影响。建议可以看看《土壤微生物DNA提取方法的研究》西北大学学报,2009,39(5)
7楼2018-03-16 10:11:26
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xiayuran

银虫 (小有名气)

有大部分菌是不可培养的,会丢失很多信息,建议直接用试剂盒提取

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8楼2021-11-06 07:03:53
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菠萝生煎

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 微基生物 at 2017-08-21 17:22:03
如果是由于样本保存的原因,条带如果有拖尾的话,说明里面DNA已经降解了。(不过在现实中,及时是不放到-20或-80保存,土壤中应该也有微生物存在,特别是细菌的)。看你做什么了,如果做细菌,那么可以用16S的一段如 ...

学到了

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9楼2021-11-06 10:43:37
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