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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 合成表征 » 用于细胞分选的链霉亲和素磁珠在与细胞悬液孵育时发现磁珠团聚聚集的现象
汕头大学海洋科学接受调剂
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pineper

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 用于细胞分选的链霉亲和素磁珠在与细胞悬液孵育时发现磁珠团聚聚集的现象 已有2人参与

用于细胞分选的链霉亲和素磁珠在与细胞悬液孵育时发现磁珠团聚聚集的现象，具体用的是1um的链霉亲和素磁珠，包好抗cd45抗体后，与外周血处理过后的细胞悬液孵育，取一小部分在光镜下观察发现团聚现象严重，很多至少成百上千的磁珠聚集在一起。请问各位有可能的原因是什么？具体怎样针对性地解决呢？
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1楼 2017-08-08 18:06:57
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
你得先搞清楚你的磁珠表面包材是什么

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2楼2017-08-08 20:01:30
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by pineper at 2017-08-09 10:15:13
亲水性磁珠表面
基于羧酸活化的磁珠
直径： 1.05 μm
大小分布： CV < 3%
未使用封闭蛋白
缓冲液中的Tween 20
等电点： pH 5.2
中等电荷 (-35 mV (pH 7))
铁含量 (铁氧体)： 26% (37%)
与M-280/M-270磁 ...

1  未使用封闭蛋白，直接有可能导致你的非特性吸附，光这个问题就够你受了
2  既然磁珠表面是羧基基团，应该告诉你羧基密度达到多少
3  sa磁珠是你自己制备还是用的成品，如果是成品应该告诉你sa磁珠可以和生物素相结合的比例
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pineper
4楼2017-08-14 11:11:10
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by pineper at 2017-08-14 11:54:36
1 因为我们用的是成品的sa磁珠，所以“未使用封闭蛋白”这个因素影响大么？
2 羧基密度确实没有描述...
3 成品sa磁珠，结合生物素的比例说清楚了。
-------------
我们现在用不同pH的buffer，用在磁珠-白细胞孵 ...

1 关于未封闭，这个是指商品化的sa磁珠用什么来封闭，不是你自己封闭，你不知道它的表面是什么类型，对你的结果有比较大的影响
2 因为sa磁珠是基于cooh磁珠嫁接，如果没有封闭，上面可能有没有封闭的cooh，那么cooh就可能和蛋白的Nh2端反应，专业特异性比较差
3 无论是偏酸还是偏碱，你可以直接检测一下你分离细胞的效果，顺便问一下，这个是国产的吧？
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pineper
6楼2017-08-14 16:09:07
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elmanbio

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by pineper at 2017-08-14 16:46:49
收到，十分感谢。
这个磁珠是进口的磁珠，你看我们还有啥条件需要注意和测试的呢？...

既然是进口磁珠，他们写的说明书比较详细，你先按照他的protocol做完以后检测一下实验效果，如果你不知道你的实验结果怎么样，我也不好判断你怎么优化！
另外，如果有成品cd45-beads，你可以用来做个对比，看看偶联效率怎么样
偶联效率和beads的粒径，悬浮沉降性，sa磁珠表面的封闭（对于化学发光来说这个非常明显，直接反应在本底值），bead的分散性以及beads 形状，当然还需要你实际实验中摸索合适的比例，祝好运！
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pineper
8楼2017-08-14 16:57:56
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
要看表面包覆材料和体系是否匹配，是表面包硅的还是苯乙烯的

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pineper
11楼2017-08-18 20:20:41
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
这是dynal的磁珠吧，是不是磁珠加多了

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18楼2017-12-02 13:39:09
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1974707632

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
pineper: 金币+5, ★有帮助 2017-12-21 21:44:08
你用的是myone吧，这个问题还真不好说，我们有时候也会出现，感觉是跟缓冲体系和磁珠表面的基团是否被封闭好有关，后来我们改用purimag的200nm链霉亲和素磁珠分选细胞没出现这个问题了。
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19楼2017-12-14 18:59:41
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普通回帖

pineper

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yubeihong at 2017-08-08 20:01:30
你得先搞清楚你的磁珠表面包材是什么

亲水性磁珠表面
基于羧酸活化的磁珠
直径： 1.05 μm
大小分布： CV < 3%
未使用封闭蛋白
缓冲液中的Tween 20
等电点： pH 5.2
中等电荷 (-35 mV (pH 7))
铁含量 (铁氧体)： 26% (37%)
与M-280/M-270磁珠相比，具有低沉降速度和更佳的反应动力学
低聚集
----------------------
这个是磁珠的说明
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3楼2017-08-09 10:15:13
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pineper

至尊木虫 (著名写手)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-14 11:11:10
1  未使用封闭蛋白，直接有可能导致你的非特性吸附，光这个问题就够你受了
2  既然磁珠表面是羧基基团，应该告诉你羧基密度达到多少
3  sa磁珠是你自己制备还是用的成品，如果是成品应该告诉你sa磁珠可以和生物素 ...

1 因为我们用的是成品的sa磁珠，所以“未使用封闭蛋白”这个因素影响大么？
2 羧基密度确实没有描述...
3 成品sa磁珠，结合生物素的比例说清楚了。
-------------
我们现在用不同pH的buffer，用在磁珠-白细胞孵育的步骤，偏碱的就有聚集的现象，偏酸的就没有，这个影响大么？
还有离子强度，看有的材料说要用0.01M pbs，离子强度低，聚集现象减弱，不知道有没有影响？
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5楼2017-08-14 11:54:36
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pineper

至尊木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-14 16:09:07
1 关于未封闭，这个是指商品化的sa磁珠用什么来封闭，不是你自己封闭，你不知道它的表面是什么类型，对你的结果有比较大的影响
2 因为sa磁珠是基于cooh磁珠嫁接，如果没有封闭，上面可能有没有封闭的cooh，那么co ...

收到，十分感谢。
这个磁珠是进口的磁珠，你看我们还有啥条件需要注意和测试的呢？
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7楼2017-08-14 16:46:49
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sgjzv42
9楼2017-08-18 06:13:54
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pineper

至尊木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-14 16:57:56
既然是进口磁珠，他们写的说明书比较详细，你先按照他的protocol做完以后检测一下实验效果，如果你不知道你的实验结果怎么样，我也不好判断你怎么优化！
另外，如果有成品cd45-beads，你可以用来做个对比，看看偶 ...

好的，特别感谢。后边有问题还是要请教啊

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10楼2017-08-18 19:36:30
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