应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 合成表征 » 用于细胞分选的链霉亲和素磁珠在与细胞悬液孵育时发现磁珠团聚聚集的现象
201/2返回列表12下一页
查看: 3001  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pineper

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 用于细胞分选的链霉亲和素磁珠在与细胞悬液孵育时发现磁珠团聚聚集的现象 已有2人参与

用于细胞分选的链霉亲和素磁珠在与细胞悬液孵育时发现磁珠团聚聚集的现象，具体用的是1um的链霉亲和素磁珠，包好抗cd45抗体后，与外周血处理过后的细胞悬液孵育，取一小部分在光镜下观察发现团聚现象严重，很多至少成百上千的磁珠聚集在一起。请问各位有可能的原因是什么？具体怎样针对性地解决呢？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-08-08 18:06:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
你得先搞清楚你的磁珠表面包材是什么

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2017-08-08 20:01:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by pineper at 2017-08-09 10:15:13
亲水性磁珠表面
基于羧酸活化的磁珠
直径： 1.05 μm
大小分布： CV < 3%
未使用封闭蛋白
缓冲液中的Tween 20
等电点： pH 5.2
中等电荷 (-35 mV (pH 7))
铁含量 (铁氧体)： 26% (37%)
与M-280/M-270磁 ...

1  未使用封闭蛋白，直接有可能导致你的非特性吸附，光这个问题就够你受了
2  既然磁珠表面是羧基基团，应该告诉你羧基密度达到多少
3  sa磁珠是你自己制备还是用的成品，如果是成品应该告诉你sa磁珠可以和生物素相结合的比例
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

pineper
4楼2017-08-14 11:11:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by pineper at 2017-08-14 11:54:36
1 因为我们用的是成品的sa磁珠，所以“未使用封闭蛋白”这个因素影响大么？
2 羧基密度确实没有描述...
3 成品sa磁珠，结合生物素的比例说清楚了。
-------------
我们现在用不同pH的buffer，用在磁珠-白细胞孵 ...

1 关于未封闭，这个是指商品化的sa磁珠用什么来封闭，不是你自己封闭，你不知道它的表面是什么类型，对你的结果有比较大的影响
2 因为sa磁珠是基于cooh磁珠嫁接，如果没有封闭，上面可能有没有封闭的cooh，那么cooh就可能和蛋白的Nh2端反应，专业特异性比较差
3 无论是偏酸还是偏碱，你可以直接检测一下你分离细胞的效果，顺便问一下，这个是国产的吧？
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

pineper
6楼2017-08-14 16:09:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elmanbio

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by pineper at 2017-08-14 16:46:49
收到，十分感谢。
这个磁珠是进口的磁珠，你看我们还有啥条件需要注意和测试的呢？...

既然是进口磁珠，他们写的说明书比较详细，你先按照他的protocol做完以后检测一下实验效果，如果你不知道你的实验结果怎么样，我也不好判断你怎么优化！
另外，如果有成品cd45-beads，你可以用来做个对比，看看偶联效率怎么样
偶联效率和beads的粒径，悬浮沉降性，sa磁珠表面的封闭（对于化学发光来说这个非常明显，直接反应在本底值），bead的分散性以及beads 形状，当然还需要你实际实验中摸索合适的比例，祝好运！
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

pineper
8楼2017-08-14 16:57:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
要看表面包覆材料和体系是否匹配，是表面包硅的还是苯乙烯的

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

pineper
11楼2017-08-18 20:20:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
这是dynal的磁珠吧，是不是磁珠加多了

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2017-12-02 13:39:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1974707632

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
pineper: 金币+5, ★有帮助 2017-12-21 21:44:08
你用的是myone吧，这个问题还真不好说，我们有时候也会出现，感觉是跟缓冲体系和磁珠表面的基团是否被封闭好有关，后来我们改用purimag的200nm链霉亲和素磁珠分选细胞没出现这个问题了。
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2017-12-14 18:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

pineper

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yubeihong at 2017-08-08 20:01:30
你得先搞清楚你的磁珠表面包材是什么

亲水性磁珠表面
基于羧酸活化的磁珠
直径： 1.05 μm
大小分布： CV < 3%
未使用封闭蛋白
缓冲液中的Tween 20
等电点： pH 5.2
中等电荷 (-35 mV (pH 7))
铁含量 (铁氧体)： 26% (37%)
与M-280/M-270磁珠相比，具有低沉降速度和更佳的反应动力学
低聚集
----------------------
这个是磁珠的说明
赞一下 回复此楼
3楼2017-08-09 10:15:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pineper

至尊木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-14 11:11:10
1  未使用封闭蛋白，直接有可能导致你的非特性吸附，光这个问题就够你受了
2  既然磁珠表面是羧基基团，应该告诉你羧基密度达到多少
3  sa磁珠是你自己制备还是用的成品，如果是成品应该告诉你sa磁珠可以和生物素 ...

1 因为我们用的是成品的sa磁珠，所以“未使用封闭蛋白”这个因素影响大么？
2 羧基密度确实没有描述...
3 成品sa磁珠，结合生物素的比例说清楚了。
-------------
我们现在用不同pH的buffer，用在磁珠-白细胞孵育的步骤，偏碱的就有聚集的现象，偏酸的就没有，这个影响大么？
还有离子强度，看有的材料说要用0.01M pbs，离子强度低，聚集现象减弱，不知道有没有影响？
赞一下 回复此楼
5楼2017-08-14 11:54:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pineper

至尊木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-14 16:09:07
1 关于未封闭，这个是指商品化的sa磁珠用什么来封闭，不是你自己封闭，你不知道它的表面是什么类型，对你的结果有比较大的影响
2 因为sa磁珠是基于cooh磁珠嫁接，如果没有封闭，上面可能有没有封闭的cooh，那么co ...

收到，十分感谢。
这个磁珠是进口的磁珠，你看我们还有啥条件需要注意和测试的呢？
赞一下 回复此楼
7楼2017-08-14 16:46:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sgjzv42
9楼2017-08-18 06:13:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pineper

至尊木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-14 16:57:56
既然是进口磁珠，他们写的说明书比较详细，你先按照他的protocol做完以后检测一下实验效果，如果你不知道你的实验结果怎么样，我也不好判断你怎么优化！
另外，如果有成品cd45-beads，你可以用来做个对比，看看偶 ...

好的，特别感谢。后边有问题还是要请教啊

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
10楼2017-08-18 19:36:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pineper 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 08工学调剂 +5 用户573181 2026-03-20 5/250 2026-03-20 15:47 by xia_2003
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+3 babangida 2026-03-19 7/350 2026-03-20 14:13 by hejicker
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +6 困于星晨 2026-03-17 8/400 2026-03-20 11:24 by kkcoco25
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 10:37 by EBSD
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +3 葵梓卫队 2026-03-18 5/250 2026-03-19 19:35 by 给你你注意休息
[考研] 一志愿北京化工大学0703化学318分，有科研经历，求调剂 +3 一瓶苯甲酸 2026-03-14 3/150 2026-03-19 15:17 by 尽舜尧1
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 10/500 2026-03-19 15:08 by 阳阳哇塞
[考研] 346求调剂[0856] +3 WayneLim327 2026-03-16 6/300 2026-03-19 11:21 by WayneLim327
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 334求调剂 +3 志存高远意在机� 2026-03-16 3/150 2026-03-18 08:34 by lm4875102
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭