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pineper

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 用于细胞分选的链霉亲和素磁珠在与细胞悬液孵育时发现磁珠团聚聚集的现象已有2人参与

用于细胞分选的链霉亲和素磁珠在与细胞悬液孵育时发现磁珠团聚聚集的现象,具体用的是1um的链霉亲和素磁珠,包好抗cd45抗体后,与外周血处理过后的细胞悬液孵育,取一小部分在光镜下观察发现团聚现象严重,很多至少成百上千的磁珠聚集在一起。请问各位有可能的原因是什么?具体怎样针对性地解决呢?
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pineper

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yubeihong at 2017-08-08 20:01:30
你得先搞清楚你的磁珠表面包材是什么

亲水性磁珠表面
基于羧酸活化的磁珠
直径: 1.05 μm
大小分布: CV < 3%
未使用封闭蛋白
缓冲液中的Tween 20
等电点: pH 5.2
中等电荷 (-35 mV (pH 7))
铁含量 (铁氧体): 26% (37%)
与M-280/M-270磁珠相比,具有低沉降速度和更佳的反应动力学
低聚集
----------------------
这个是磁珠的说明
3楼2017-08-09 10:15:13
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


你得先搞清楚你的磁珠表面包材是什么

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-08-08 20:01:30
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by pineper at 2017-08-09 10:15:13
亲水性磁珠表面
基于羧酸活化的磁珠
直径: 1.05 μm
大小分布: CV < 3%
未使用封闭蛋白
缓冲液中的Tween 20
等电点: pH 5.2
中等电荷 (-35 mV (pH 7))
铁含量 (铁氧体): 26% (37%)
与M-280/M-270磁 ...

1  未使用封闭蛋白,直接有可能导致你的非特性吸附,光这个问题就够你受了
2  既然磁珠表面是羧基基团,应该告诉你羧基密度达到多少
3  sa磁珠是你自己制备还是用的成品,如果是成品应该告诉你sa磁珠可以和生物素相结合的比例

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2017-08-14 11:11:10
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pineper

至尊木虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-14 11:11:10
1  未使用封闭蛋白,直接有可能导致你的非特性吸附,光这个问题就够你受了
2  既然磁珠表面是羧基基团,应该告诉你羧基密度达到多少
3  sa磁珠是你自己制备还是用的成品,如果是成品应该告诉你sa磁珠可以和生物素 ...

1 因为我们用的是成品的sa磁珠,所以“未使用封闭蛋白”这个因素影响大么?
2 羧基密度确实没有描述...
3 成品sa磁珠,结合生物素的比例说清楚了。
-------------
我们现在用不同pH的buffer,用在磁珠-白细胞孵育的步骤,偏碱的就有聚集的现象,偏酸的就没有,这个影响大么?
还有离子强度,看有的材料说要用0.01M pbs,离子强度低,聚集现象减弱,不知道有没有影响?
5楼2017-08-14 11:54:36
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