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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » cDNA合成
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洋小妞baby

新虫 (初入文坛)

[求助] cDNA合成 已有1人参与

第一次发帖。。。
想请教一下关于cDNA合成的问题
在反应管中加入RNA模板和反应液使成20 μl的反应体系，然后进行42℃的孵育，想问一下是待恒温器的温度到42℃然后再放反应管，还是一开始的时候就把反应管放进去，等温度慢慢升到42℃呢？
进行反转录合成后，是等温度降低到0℃再拿开反应管，还是加热完就直接拿开反应管。
多谢各位
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1楼 2017-08-07 20:02:14
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sky蒲公英

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个其实没那么严格的，我们都是加完样之后直接放PCR 仪里控制温度，进行反应的。

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
3楼2017-08-07 20:25:56
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洋小妞baby

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-08-07 20:43:41
反应温度为42度，，既   不低也不高。温度需预设

那我有好几个温度程序呢，感觉其实就想PCR一样，需不需要预设都可以，直接把RNA放进去，然后升温到42℃，逆转录，这样理解对不
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6楼2017-08-08 09:58:48
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2楼2017-08-07 20:07:48
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)
反应温度为42度，，既   不低也不高。温度需预设

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4楼2017-08-07 20:43:41
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洋小妞baby

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 阿同木 at 2017-08-07 20:07:48
都是恒温放和取吧，我是这样做的。提前调好温度了

那比如说是一系列的温度，先25℃恒温10min，然后42℃15min，然后又85℃呢，我可以直接设置一个程序，等温度恒温到25℃把反应管放进去然后就按照程序走，还是分别等温度恒温到不同温度再放反应管呢
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5楼2017-08-08 09:51:12
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 洋小妞baby at 2017-08-08 09:58:48
那我有好几个温度程序呢，感觉其实就想PCR一样，需不需要预设都可以，直接把RNA放进去，然后升温到42℃，逆转录，这样理解对不...

最好不用pcr仪，恒温几十分钟，对pcr仪伤害其实挺大的，如果你们实验室不介意的话，就无所谓了

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7楼2017-08-08 10:02:31
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洋小妞baby

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-08-08 10:02:31
最好不用pcr仪，恒温几十分钟，对pcr仪伤害其实挺大的，如果你们实验室不介意的话，就无所谓了
...

不用PCR仪,用的是恒温器，完全新手
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8楼2017-08-08 10:30:11
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极北小白熊

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 洋小妞baby at 2017-08-08 10:30:11
不用PCR仪,用的是恒温器，完全新手...

水浴锅  就行。。反转录要求没有那么高。。

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9楼2017-08-08 11:15:29
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洋小妞baby

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 极北小白熊 at 2017-08-08 11:15:29
水浴锅  就行。。反转录要求没有那么高。。
...

好滴，谢谢
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10楼2017-08-08 15:58:51
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