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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 目的蛋白将His tag包裹，蛋白不与镍柱结合？急求纯化蛋白的大神指点！
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阳光雨露118

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-08-06 23:39:25
（1）超声的功率不对(太大，蛋白炭化，太小，蛋白没有释放) 策略：改变超声功率，并在超声前加入溶菌酶。

（2）样品或者是结合缓冲液不正确： 策略：检测pH 及样品和结合缓冲液的组成份（EDTA等）。确保在溶液 中 ...

谢谢您，我增加his标签看看，非常感谢！

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11楼2017-08-07 17:37:57
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阳光雨露118

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小书生gg at 2017-08-07 08:09:59
不好意思，上面说的把蛋白当成原核的来处理了。如果是原核表达，你可以参照一下，如果不是你就变性一下，再复性。实在不行你就重新构建到一个新载体中试试。

好的，谢谢哦

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12楼2017-08-07 17:38:49
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阳光雨露118

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小书生gg at 2017-08-07 08:01:37
原核表达很多蛋白都会过量表达。蛋白短时间内大量表达而来不及正确折叠，你先把你现有的表达时间缩小一倍看看。如果还不能解决，你只能想办法把把结构打开，再重新折叠。对了，你的蛋白不挂柱，但能溶解吗？有没有 ...

能溶解，没有沉淀的

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13楼2017-08-07 17:39:46
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阳光雨露118

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-08-06 23:39:25
（1）超声的功率不对(太大，蛋白炭化，太小，蛋白没有释放) 策略：改变超声功率，并在超声前加入溶菌酶。

（2）样品或者是结合缓冲液不正确： 策略：检测pH 及样品和结合缓冲液的组成份（EDTA等）。确保在溶液 中 ...

大神你好，我还想请教您，在您回复我的第(4)条策略二里的孵育具体指那个操作呢？

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14楼2017-08-07 19:45:07
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杨默格

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
15楼2017-08-09 16:05:54
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周虫虫mini

新虫 (小有名气)
送红花一朵
您好，我也遇到类似的情况，请问您是怎么增加从六个增加到九个的呢，希望您给我个回复，非常感谢～

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16楼2017-12-18 18:26:49
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槑烦恼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by armigera at 2017-08-07 06:08:00
可以变性纯化，得到蛋白后再复性。用酶活来标记复性蛋白比率。
...

请问具体该怎么做？
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17楼2018-08-25 12:39:48
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小树懒很好

新虫 (小有名气)
请问楼主的问题解决了吗？是怎么解决的呢？我更换了his标签的位置和数量后还是挂柱效率低

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18楼2021-04-19 00:04:09
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