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艾玛茜茜

新虫 (初入文坛)

[交流] 离心沉淀部分做电泳实验,上样前如何处理这个样品? 已有3人参与

大家好,请教大家一个问题。我要制备青虾的多肽,现已进行了粗蛋白带我提取:虾粉用95%的乙醇先进行了脱脂,完后添加NaOH保温,离心取上轻,用HCL调ph后进行离心取沉淀得到粗蛋白。现在想用这个粗蛋白进行电泳实验,如何处理?是不是要先溶解这个粗蛋白,用缓冲液?文献没有查到相关方法,不知道要如何进行,请大神指教!

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knighthan112

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蛋白电泳的话基本套路都是水溶,然后加合适的loadingbuffer还原。(一般加DTT的缓冲液)你这种蛋白水溶吗
2楼2017-08-04 17:13:42
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llsskk112233

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
提取方法没错吗?乙醇不会使蛋白变性吗?

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3楼2017-08-04 19:36:14
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艾玛茜茜

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by knighthan112 at 2017-08-04 17:13:42
蛋白电泳的话基本套路都是水溶,然后加合适的loadingbuffer还原。(一般加DTT的缓冲液)你这种蛋白水溶吗

可以水容,用pbs也可以吗?

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4楼2017-08-14 23:16:30
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艾玛茜茜

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by llsskk112233 at 2017-08-04 19:36:14
提取方法没错吗?乙醇不会使蛋白变性吗?

参考的一片英文文献是这么做的,用乙醇为了去油脂。我想知道蛋白如果变性的话,蛋白经过酶解得到的多肽有没有可能有活性?

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5楼2017-08-14 23:18:20
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xmu_qpg

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
提取蛋白的沉淀部分,通常称为insoluble protein,可以考虑sds ?超声

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6楼2017-08-15 07:36:27
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艾玛茜茜

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xmu_qpg at 2017-08-15 07:36:27
提取蛋白的沉淀部分,通常称为insoluble protein,可以考虑sds ?超声

sds了

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7楼2017-08-15 15:06:26
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