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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 离心沉淀部分做电泳实验，上样前如何处理这个样品？
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艾玛茜茜

新虫 (初入文坛)

[交流] 离心沉淀部分做电泳实验，上样前如何处理这个样品？ 已有3人参与

大家好，请教大家一个问题。我要制备青虾的多肽，现已进行了粗蛋白带我提取:虾粉用95%的乙醇先进行了脱脂，完后添加NaOH保温，离心取上轻，用HCL调ph后进行离心取沉淀得到粗蛋白。现在想用这个粗蛋白进行电泳实验，如何处理？是不是要先溶解这个粗蛋白，用缓冲液？文献没有查到相关方法，不知道要如何进行，请大神指教！

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1楼 2017-08-04 15:26:20
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knighthan112

新虫 (初入文坛)
★
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蛋白电泳的话基本套路都是水溶，然后加合适的loadingbuffer还原。（一般加DTT的缓冲液）你这种蛋白水溶吗
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2楼2017-08-04 17:13:42
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llsskk112233

新虫 (正式写手)
★
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提取方法没错吗？乙醇不会使蛋白变性吗？

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3楼2017-08-04 19:36:14
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艾玛茜茜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by knighthan112 at 2017-08-04 17:13:42
蛋白电泳的话基本套路都是水溶，然后加合适的loadingbuffer还原。（一般加DTT的缓冲液）你这种蛋白水溶吗

可以水容，用pbs也可以吗？

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4楼2017-08-14 23:16:30
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艾玛茜茜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by llsskk112233 at 2017-08-04 19:36:14
提取方法没错吗？乙醇不会使蛋白变性吗？

参考的一片英文文献是这么做的，用乙醇为了去油脂。我想知道蛋白如果变性的话，蛋白经过酶解得到的多肽有没有可能有活性？

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5楼2017-08-14 23:18:20
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xmu_qpg

铜虫 (初入文坛)
★
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提取蛋白的沉淀部分，通常称为insoluble protein,可以考虑sds ?超声

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6楼2017-08-15 07:36:27
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艾玛茜茜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xmu_qpg at 2017-08-15 07:36:27
提取蛋白的沉淀部分，通常称为insoluble protein,可以考虑sds ?超声

sds了

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7楼2017-08-15 15:06:26
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