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littlepieyes

铜虫 (小有名气)

[求助] 用TB培养重组大肠杆菌,离心得菌量极少 已有1人参与

TB培养基已经分开灭菌,但是大肠杆菌表达菌量时多时少,IPTG终浓度不超过1mM。有说是染菌,可是同批操作,有的多有的少,有出现过这种情况吗?

用TB培养重组大肠杆菌,离心得菌量极少
TB培养基,左图菌量多.jpg


用TB培养重组大肠杆菌,离心得菌量极少-1
TB菌体所得量.jpg
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想你的夏季1

新虫 (小有名气)

大哥   这是你培养条件的问题  你看下你配的培养基浓度是否一样(配置时有无充分混匀)  然后就是你的接种量是否一致

发自小木虫Android客户端
2楼2017-08-02 22:39:31
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3楼2017-08-21 06:40:02
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ABCeffort

新虫 (初入文坛)

4楼2018-01-11 20:18:59
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ABCeffort

新虫 (初入文坛)

不好意思,前面不小心弄错就发出去了,你的菌已经死了就没长起来,可能有污染

发自小木虫Android客户端
5楼2018-01-11 20:21:00
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zsygxh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1mM IPTG高了,建议OD0.6, 0.1mM诱导,我多个菌,一般1L TB能收10g左右,如过用OD0.6,0.05mM诱导,能收15g左右,但蛋白表达总量差不多,如果用0.5以上菌量就明显下降了。当然你这个是不正常的,看图片应该是菌死了,像染菌,我有遇到过,跟图片一模一样,我的处理方式:瓶子180℃烤4h,重配培养基(尽量用未拆封的),灭菌,去其它课题组借超净台、摇床摇菌,然后正常了。
如果不行,看一下菌株是否合适
6楼2018-01-11 20:49:00
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