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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 用TB培养重组大肠杆菌，离心得菌量极少
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littlepieyes

铜虫 (小有名气)

[求助] 用TB培养重组大肠杆菌，离心得菌量极少 已有1人参与

TB培养基已经分开灭菌，但是大肠杆菌表达菌量时多时少，IPTG终浓度不超过1mM。有说是染菌，可是同批操作，有的多有的少，有出现过这种情况吗？

用TB培养重组大肠杆菌，离心得菌量极少
TB培养基，左图菌量多.jpg


用TB培养重组大肠杆菌，离心得菌量极少-1
TB菌体所得量.jpg
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1楼 2017-08-02 20:15:11
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想你的夏季1

新虫 (小有名气)
大哥   这是你培养条件的问题  你看下你配的培养基浓度是否一样（配置时有无充分混匀）  然后就是你的接种量是否一致

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2楼2017-08-02 22:39:31
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pcduak57
3楼2017-08-21 06:40:02
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ABCeffort

新虫 (初入文坛)
你的kun

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4楼2018-01-11 20:18:59
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ABCeffort

新虫 (初入文坛)
不好意思，前面不小心弄错就发出去了，你的菌已经死了就没长起来，可能有污染

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5楼2018-01-11 20:21:00
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zsygxh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1mM IPTG高了，建议OD0.6, 0.1mM诱导，我多个菌，一般1L TB能收10g左右，如过用OD0.6，0.05mM诱导，能收15g左右，但蛋白表达总量差不多，如果用0.5以上菌量就明显下降了。当然你这个是不正常的，看图片应该是菌死了，像染菌，我有遇到过，跟图片一模一样，我的处理方式：瓶子180℃烤4h，重配培养基（尽量用未拆封的），灭菌，去其它课题组借超净台、摇床摇菌，然后正常了。
如果不行，看一下菌株是否合适
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6楼2018-01-11 20:49:00
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