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mochenmi

铜虫 (小有名气)

[求助] 一个试验想法 已有1人参与

有个试验想法,目的是筛真菌体内某个基因的靶标蛋白。
1. 使用真核表达载体构建基因与GST的融合蛋白;
2. 表达后提取真菌总蛋白,然后挂GST的柱子;
3. 洗去杂蛋白后,洗脱目的蛋白,这样得到的是目的蛋白与靶标蛋白的复合体。
不知道这个想法能否行得通?感觉类似于免疫沉淀,是在体内先结合,这样更加native。请各位大神指示一下~
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-02 07:45:09
这个实验应该叫GST pull down吧,理论上可以,但实际操作起来有困难。我不是做这个方向的,你可以问蛋白方向的人这个技术。
2楼2017-08-01 22:53:57
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-02 07:44:55
你的实验设计很好,可以往下进行,不过小心GST会影响你蛋白功能,做好用flag
3楼2017-08-02 01:05:20
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mochenmi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-08-01 22:53:57
这个实验应该叫GST pull down吧,理论上可以,但实际操作起来有困难。我不是做这个方向的,你可以问蛋白方向的人这个技术。

GST pull-down一般是体外结合吧,我想的是在体内先结合好,然后挂柱收集洗脱
4楼2017-08-02 16:52:38
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mochenmi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-08-02 01:05:20
你的实验设计很好,可以往下进行,不过小心GST会影响你蛋白功能,做好用flag

多谢,Flag标签同样也有专门的纯化柱子是吧?
5楼2017-08-02 16:55:17
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by mochenmi at 2017-08-02 16:55:17
多谢,Flag标签同样也有专门的纯化柱子是吧?...

对的
6楼2017-08-03 00:16:38
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