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youngsun50木虫 (正式写手)
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用质粒做real-time PCR标准曲线，效果差。求助！已有2人参与
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各位虫友，我用real-time PCR做Albumin的标准曲线，是用克隆了albumin序列的重组质粒做逐级10倍稀释（10^6 到10^0拷贝）。之前做过好多次，效果都很好，定量范围（即两个10倍稀释点之间的△Ct：2.6~4.0；复孔的△Ct<1.5）能够到10个拷贝。我3月1日做还是可以的，到3月15日再做，就开始变差了，这两次的条件包括质粒和试剂都没变。最近多次做的效果都能差，一些10倍稀释点之间的△Ct都>4.0，有时候有的点的复孔△Ct也>1.5。 我尝试过消除可能的原因，包括把引物和探针都新合成，质粒重新克隆并提取，换其他牌子的PCR mastermix， 结果都没有改善。 请给予建议或分析可能的原因，谢谢！  |
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youngsun50
木虫 (正式写手)
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