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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 反转录用于qPCR的cDNA模板能否用于普通PCR扩增1-2k的序列？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yippee_jiang

新虫 (小有名气)

[求助] 反转录用于qPCR的cDNA模板能否用于普通PCR扩增1-2k的序列？ 已有2人参与

trizol法提了两次总RNA，但是有的基因扩增出来的片段比预测的序列多100+bp，有的基因多300+bp，不知道是预测的不准还是由于基因组DNA污染的问题，所以想用之前制备的qPCR模板试一下，因为这些模板制作的时候都用了去除基因组的试剂盒，但是听说qPCR模板允许扩增的片段较小，不能扩增较长片段序列，请哪位老师解释一下，谢谢！

BTW，我用本地BLAST在草鱼基因组中找到的目标序列，也就是我预测的序列，有没有可能是他基因组数据缺失一部分？
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1楼 2017-07-24 21:57:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

日光海

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by yippee_jiang at 2017-07-26 17:11:07
问他们技术了，是个新手，说不清楚，只是强调他们用于qPCR的反转录试剂盒不能用于扩增跨一个内含子的基因，问为什么她也说不出来，就这个还是她去咨询了之后给我的回复...

应为cDNA是原始的DNA模板中取出内含子的部分。比如原始模板顺序：“A+内含子+B”，它的RNA反转除的cDNA是：“A+B”，所以用“A+B”的cDNA做模板扩增是得不到“A+内含子+B”的。
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周老湿
10楼2017-11-03 13:10:57
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普通回帖

1993云崖

木虫 (小有名气)
可以

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暮雪千山，厚积薄发
2楼2017-07-24 22:35:16
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以扩增的。rt-qPCR的模板时总RNA逆转录的cDNA。
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
3楼2017-07-25 15:51:19
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yippee_jiang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangranjun at 2017-07-25 15:51:19
可以扩增的。rt-qPCR的模板时总RNA逆转录的cDNA。

但是，我用takara的for real time的反转录试剂盒做的cDNA模板在相同的条件下跑不出来，普通反转录的能跑出来
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4楼2017-07-26 09:08:44
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by yippee_jiang at 2017-07-26 09:08:44
但是，我用takara的for real time的反转录试剂盒做的cDNA模板在相同的条件下跑不出来，普通反转录的能跑出来...

我们实验室也一直在用takara的逆转录试剂盒，做克隆一般都没问题的。你用的那个试剂盒有什么特殊要求吗？
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
5楼2017-07-26 10:07:17
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yippee_jiang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangranjun at 2017-07-26 10:07:17
我们实验室也一直在用takara的逆转录试剂盒，做克隆一般都没问题的。你用的那个试剂盒有什么特殊要求吗？...

问他们技术了，是个新手，说不清楚，只是强调他们用于qPCR的反转录试剂盒不能用于扩增跨一个内含子的基因，问为什么她也说不出来，就这个还是她去咨询了之后给我的回复
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6楼2017-07-26 17:11:07
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王查查23

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2017-07-26 17:50:05
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rvnsg86
8楼2017-08-20 05:41:33
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out_of_sight

新虫 (小有名气)
楼主怎么找到的草鱼基因组？可以帮我找一个草鱼基因的序列吗？
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9楼2017-08-26 10:12:34
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