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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 买回的高浓度的酶如何分装？一般用什么溶剂？储存温度如何？
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xuping123465

新虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by bbqlhb at 2017-07-28 09:07:47
不懂，你还想在紫外灯下操作？操作台紫外杀一下菌再做就好，话说你做什么实验，无菌与有菌对你有什么影响...

你好，我的实验就是黄嘌呤氧化酶的抑制实验。大概过程如下：
“总体积3000μl。加缓冲液（共3000-15-40-225=2720μl），加CPD 50μM（取10mM 15μl），加黄嘌呤氧化酶（取2units/ml 40μl），反应混匀后在25°C恒温培养箱中培养15min，再加入底物黄嘌呤（取1mM的225μl），再继续培养5min，测测295nm处的吸收值（OD）。”

我的疑问是：
我的黄嘌呤氧化酶它一共有5个单位。一次只用移液枪取50微升的样子。如果随取随用，所以肯定会将剩下的酶放置4°C的冰箱中储存。若枪头不灭菌，那酶液用该枪头取过再放进冰箱储存是否会导致酶液变质，从而影响酶活？（因为我考虑酶是蛋白质）
所以我是怀疑它要灭菌，但仍不确定，请您指教下，十分感谢。
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11楼2017-07-28 09:26:50
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xuping123465

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10楼: Originally posted by bbqlhb at 2017-07-28 09:07:47
不懂，你还想在紫外灯下操作？操作台紫外杀一下菌再做就好，话说你做什么实验，无菌与有菌对你有什么影响...

我的实验就是黄嘌呤氧化酶的抑制实验，部分操作如下：

"总体积3000μl。加缓冲液（共3000-15-40-225=2720μl），加CPD 50μM（取10mM 15μl），加黄嘌呤氧化酶（取2units/ml 40μl），反应混匀后在25°C恒温培养箱中培养15min，再加入底物黄嘌呤（取1mM的225μl），再继续培养5min，测测295nm处的吸收值（OD）。"
我的疑惑是
我买的黄嘌呤氧化酶共2ml，我每次只取个50微升，那么剩下的酶液定要放4°C中进行储存。若我移液枪头未经灭菌，那么一次取液后定会将细菌带入，那存储后是否会滋生更多的细菌，把酶破坏，使酶活丧失？（酶是蛋白质是吧）。

不知道我想的是否正确，所以我不知是否要有灭菌，还请您指导。
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12楼2017-07-28 09:36:30
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xuping123465

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10楼: Originally posted by bbqlhb at 2017-07-28 09:07:47
不懂，你还想在紫外灯下操作？操作台紫外杀一下菌再做就好，话说你做什么实验，无菌与有菌对你有什么影响...

我的实验就是黄嘌呤氧化酶的抑制实验，部分操作如下：

"总体积3000μl。加缓冲液（共3000-15-40-225=2720μl），加CPD 50μM（取10mM 15μl），加黄嘌呤氧化酶（取2units/ml 40μl），反应混匀后在25°C恒温培养箱中培养15min，再加入底物黄嘌呤（取1mM的225μl），再继续培养5min，测测295nm处的吸收值（OD）。"
我的疑惑是
我买的黄嘌呤氧化酶共2ml，我每次只取个50微升，那么剩下的酶液定要放4°C中进行储存。若我移液枪头未经灭菌，那么一次取液后定会将细菌带入，那存储后是否会滋生更多的细菌，把酶破坏，使酶活丧失？（酶是蛋白质是吧）。不知道我想的是否正确，所以我不知是否要有灭菌，还请您指导。
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13楼2017-07-28 09:38:59
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xuping123465

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10楼: Originally posted by bbqlhb at 2017-07-28 09:07:47
不懂，你还想在紫外灯下操作？操作台紫外杀一下菌再做就好，话说你做什么实验，无菌与有菌对你有什么影响...

我的实验就是黄嘌呤氧化酶的抑制实验，部分操作如下：

"总体积3000μl。加缓冲液（共3000-15-40-225=2720μl），加CPD 50μM（取10mM 15μl），加黄嘌呤氧化酶（取2units/ml 40μl），反应混匀后在25°C恒温培养箱中培养15min，再加入底物黄嘌呤（取1mM的225μl），再继续培养5min，测测295nm处的吸收值（OD）。"
我的疑惑是
我买的黄嘌呤氧化酶共2ml，我每次只取个50微升，那么剩下的酶液定要放4°C中进行储存。若我移液枪头未经灭菌，那么一次取液后定会将细菌带入，那存储后是否会滋生更多的细菌，把酶破坏，使酶活丧失？（酶是蛋白质是吧）。不知道我想的是否正确，所以我不知是否要有灭菌，还请您指导。
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14楼2017-07-28 09:39:46
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xuping123465

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10楼: Originally posted by bbqlhb at 2017-07-28 09:07:47
不懂，你还想在紫外灯下操作？操作台紫外杀一下菌再做就好，话说你做什么实验，无菌与有菌对你有什么影响...

不好意思，上面几个都是重复的，您只看上面其中一个就好。
因为一页十楼，我回复后没发现自己回复的内容，以为回复不成功，所以又回了几次，
后来发现在第二页，又不能删除，不好意思，请多担待些。
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15楼2017-07-28 09:52:30
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bbqlhb

木虫 (小有名气)
做培养实验，枪头灭菌是常识吧。
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16楼2017-07-28 11:52:53
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xuping123465

新虫 (小有名气)
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16楼: Originally posted by bbqlhb at 2017-07-28 11:52:53
做培养实验，枪头灭菌是常识吧。

我说了我没做过酶类的啊，所以才问你那么多，
培养那一步请忽略，因为时间短，而且指标只是尿酸的生产量。
现在主要是如下：
我买的黄嘌呤氧化酶共2ml，我每次只取个50微升，那么剩下的酶液定要放4°C中进行储存。若我移液枪头未经灭菌，那么一次取液后定会将细菌带入，那存储后是否会滋生更多的细菌，把酶破坏，使酶活丧失？（酶是蛋白质是吧）。不知道我想的是否正确，所以我不知是否要有灭菌，。
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17楼2017-07-28 13:12:46
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xuping123465

新虫 (小有名气)
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16楼: Originally posted by bbqlhb at 2017-07-28 11:52:53
做培养实验，枪头灭菌是常识吧。

谢谢你，看我啰嗦了这么久，我想枪头什么的直接买无菌的也行。
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18楼2017-07-28 14:34:36
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