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xuping123465

新虫 (小有名气)

[求助] 买回的高浓度的酶如何分装?一般用什么溶剂?储存温度如何? 已有2人参与

我在sigma买了一小瓶黄嘌呤氧化酶。其是悬浮液,共5U。
我每次可能只去0.1个U,那么如此肯定需要分装。
但我没做过酶类,不知道如何分装,边上也没人会这个,所以在这里求助各位,希望有内行人能指导下十分感谢
下面是网站上酶液的描述:

包装
5, 25 units in serum bottle

物理状态
Suspension in 2.3 M (NH4)2SO4 containing 1 mM sodium salicylate

网页链接是
http://www.sigmaaldrich.com/cata ... h&region=CN

在这里恳请各位指导。
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xuping123465

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by bbqlhb at 2017-07-28 09:07:47
不懂,你还想在紫外灯下操作?操作台紫外杀一下菌再做就好,话说你做什么实验,无菌与有菌对你有什么影响...

我的实验就是黄嘌呤氧化酶的抑制实验,部分操作如下:

"总体积3000μl。加缓冲液(共3000-15-40-225=2720μl),加CPD 50μM(取10mM 15μl),加黄嘌呤氧化酶(取2units/ml 40μl),反应混匀后在25°C恒温培养箱中培养15min,再加入底物黄嘌呤(取1mM的225μl),再继续培养5min,测测295nm处的吸收值(OD)。"
我的疑惑是
我买的黄嘌呤氧化酶共2ml,我每次只取个50微升,那么剩下的酶液定要放4°C中进行储存。若我移液枪头未经灭菌,那么一次取液后定会将细菌带入,那存储后是否会滋生更多的细菌,把酶破坏,使酶活丧失?(酶是蛋白质是吧)。

不知道我想的是否正确,所以我不知是否要有灭菌,还请您指导。
12楼2017-07-28 09:36:30
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查看全部 18 个回答

bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xuping123465: 金币+20, ★★★很有帮助 2017-07-25 08:47:24
直接分装,例如你一次0.1U是在0.2mL PCR管中做实验,你就分装至PCR管,要用直接加其他试剂即可
2楼2017-07-24 19:13:43
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xuping123465

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bbqlhb at 2017-07-24 19:13:43
直接分装,例如你一次0.1U是在0.2mL PCR管中做实验,你就分装至PCR管,要用直接加其他试剂即可

你好,很感谢,听你说我大致明白了。
不过我还有两个疑虑,希望您能帮我解惑。
1:上述原装酶液标签注明是suspension 悬浮液,并非均一的溶液,那么我分装时仍直接用移液枪移取吗?
2:其标注的储藏温度为2-8°C,那我分装后若暂时不用那么应该放在4°C的冰箱中还是放置于-20°C保存呢?
3楼2017-07-25 09:06:24
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liugs

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

4楼2017-07-25 09:32:11
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