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木虫 (正式写手)

wublab

[求助] 关于感受态细胞制备的疑问 已有3人参与

一直以来做的感受态细胞转化率都不是很高,现在想问几个问题。我们一直都是用takara的感受态细胞的kit制作的。
在加入solution a和solution b的时候都有一个除尽液体,目的是为了使转化率提高,为什么,我们一般用移液枪吸出来但是不是特别干净,之前用的是滤纸,还有有什么好的方法吗?
还有就是有两个步骤需要离心,然后沉淀要让它悬浮起来接触溶液,试剂盒上面说的是用手指轻轻弹,不能剧烈震荡,这个剧烈的程度是什么,我手指甲都给弹痛了,还是没有浮起来。后面他们都是用枪抽吸混匀的,这样对吗?

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zhouxfd

木虫 (正式写手)

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★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-07-22 08:50:43
感受态制作关键是:
1. 所有操作必须在4°,
2. CaCl2 洗几遍后要让细胞孵育至少1小时在CaCl2中
3. 细菌不要培养到stationary phase。
5楼2017-07-22 01:18:29
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-22 08:50:23
1、稍微用手指轻弹即可。

2、对于沉淀部分,用移液枪轻轻吹打混匀,即反复吸打。
及时行乐,人生不留遗憾!
4楼2017-07-21 22:53:39
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江灵敏

新虫 (小有名气)

我们都是自己做的感受态,转化效率挺高的

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6楼2017-07-22 09:51:22
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1006641214

木虫 (正式写手)

wublab

你好
2楼2017-07-21 15:37:52
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1006641214

木虫 (正式写手)

3楼2017-07-21 16:26:01
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木虫 (正式写手)

wublab

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5楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-22 01:18:29
感受态制作关键是:
1. 所有操作必须在4°,
2. CaCl2 洗几遍后要让细胞孵育至少1小时在CaCl2中
3. 细菌不要培养到stationary phase。

taraka的试剂盒里面solution a和b是Cacl2吗

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你好
7楼2017-07-22 11:22:39
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1006641214

木虫 (正式写手)

wublab

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5楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-22 01:18:29
感受态制作关键是:
1. 所有操作必须在4°,
2. CaCl2 洗几遍后要让细胞孵育至少1小时在CaCl2中
3. 细菌不要培养到stationary phase。

我想问一下细胞孵育是在什么时候?
试剂盒加完solution b就开始保存了。

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你好
8楼2017-07-22 11:25:02
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木虫 (正式写手)

wublab

引用回帖:
6楼: Originally posted by 江灵敏 at 2017-07-22 09:51:22
我们都是自己做的感受态,转化效率挺高的

有详细的步骤和注意事项吗。

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你好
9楼2017-07-22 11:25:30
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木虫 (正式写手)

wublab

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-22 01:18:29
感受态制作关键是:
1. 所有操作必须在4°,
2. CaCl2 洗几遍后要让细胞孵育至少1小时在CaCl2中
3. 细菌不要培养到stationary phase。

嗯嗯我们的abs=600的od一般在0.35到0.5之间,但是如果长过一点点的话有什么问题吗。

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你好
10楼2017-07-22 11:38:38
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