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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 植保 » DNA 降解，有颜色。浓度低
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Lingabay

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA 降解，有颜色。浓度低 已有2人参与

用CTAB法提取卵菌(类似真菌)的DNA 后，降解严重并且浓度低，还有带颜色。各位大神有什么好招吗？

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1楼 2017-07-19 19:33:57
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、 可以考虑是不是样品不纯，目的产物与杂带相差不大，所以要多跑一段时间才有尾巴。参考marker,marker应该不会有。如果有的话说明配胶有问题。
2 、琼脂糖检测DNA一般去1~5微升原液，加2微升溴酚蓝便可，注意上样浓度；
3、可能是原液浓度太大造成的；
4、可能DNA已降解。
5、在提取前对样品进行一定的脱腐处理呀。很简单。有一种TENP buffer，文献中查的到的。
6、 DNA降解避免核酸酶污染。
7、 DNA上样量过多，可以减少凝胶中DNA上样量。
8、 所用电泳条件不合适，可以将电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA链，温度应   ＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。
9、 DNA样含盐过高，可以在电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。
10、 有蛋白污染，可以采用电泳前酚抽提去除蛋白。
11、 DNA变性，电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-19 21:13:34
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Lingabay(晋鹏代发): 金币+1, 鼓励回帖交流~ 2017-07-22 21:45:21
用试剂盒提吧，promaga 或 qiagen
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3楼2017-07-20 08:44:42
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Lingabay

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-20 08:44:42
用试剂盒提吧，promaga 或 qiagen

试剂盒能解决RNA 污染和颜色问题。但还是不能解决降解问题

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4楼2017-07-21 17:52:16
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Lingabay at 2017-07-21 17:52:16
试剂盒能解决RNA 污染和颜色问题。但还是不能解决降解问题
...

可以解决，就是因为你用的管子和试剂有RNase
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5楼2017-07-22 00:56:32
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Lingabay

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-22 00:56:32
可以解决，就是因为你用的管子和试剂有RNase...

嗯呢，可是降解问题还是不能解决

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6楼2017-07-22 10:33:39
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huayueyang

新虫 (小有名气)
★
Lingabay(晋鹏代发): 金币+1, 鼓励回帖交流~ 2017-07-22 21:45:36
研磨加裂解成分时200ul巯基乙醇，研磨时液氮充分

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坚持！
7楼2017-07-22 19:58:05
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