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Stbl3感受态细胞制备疑惑 已有2人参与
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1. 活化Stbl3（invitrogen）时，用LB平板的话需要加链霉素吗，浓度为多少？因为产品说明书表明其带链霉素抗性； 2. 用什么方法制备要好一些？CaCl2？ 3.平常用的热激法就可以用于Stbl3的转化了吗？如果载体带氨苄抗性，是否平板上要同时带有氨苄和链霉素抗性？ 谢谢大家~~ |
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2楼2017-07-12 01:56:13
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参照1990年《Gene》上刊登的由Inoue H.等提出的高效感受态的制备与转化方法。 1、 活化Stbl3（invitrogen）时，什么抗生素都不加。 2、转化时，感受态细胞膜由于吸附阳离子（Ca2+等）呈液晶状态，受到热激后，细胞膜出现裂隙，外源DNA进入细胞，此时细胞非常脆弱，将其冰浴冷却，细胞膜修复闭合，进行下一步的复苏时细胞存活率将提高。 CaCl2转，电转均可。电转比较方便，但是CaCl2转普遍效果较好。 3、热激法是最好的方法。将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激（90s），细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动，并随机出现许多间隙，外源DNA就可能被细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达，实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 最好是同时加 氨苄 和 链霉素抗性，降低假阳性。 |
3楼2017-07-12 10:39:03
4楼2017-08-11 10:27:16