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MALDI-TOF好用吗？ 发自小木虫IOS客户端 |
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晋鹏
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【答案】应助回帖
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1、MALDI-TOF质谱是分子生物学领域中最有效的工具之一。它可以用来表征相对分子质量范围在400～350000的生物分子,例如蛋白质、肽、寡糖和寡核苷酸。 2、操作规程： 一 样品制备 待测样品在检测前需进行脱盐纯化处理，蛋白应进行充分透析，多肽和寡核 苷酸样品可以采用ZipTip等脱盐柱进行纯化脱盐。 二 基质溶液的配制 一般采用α-氰基-4-羟基肉桂酸（简称CHCA），纯度在98%以上，用50%乙腈水溶液 （经等体积色谱纯乙腈和去离子水配制而成）配制成终浓度为10mg/mL的溶液，于4℃储存备用。 三 点靶 每个点样孔点样0.3-0.5μL，具体视样品浓度而定，样品可以先与等体积基质溶液混匀后点板，也可以先点样品，待样品干燥后在样品上覆盖等体积的基质溶液。 四 进靶 进靶之前先对目标靶板进行命名，方法：依次点击“File”-“New”-“Spot set”， 打开“Spot set”创建流程，按上面的方法依次对“Spot set”和“Plate”进行命名，然后根据靶板的类型选择“Spot set”的模板。用洗耳球将样品靶上的灰尘吹净，将靶板放入“Sample loading chamber”，点击“Load plate”按钮开始进板。 五 检测 根据待测样品的性质及检测目的打开相应的“Acquisition method”和 “processing method”，点击软件操作界面上的“Set as active”按钮其激活，点击“Turn on/off High Voltage”按钮打开高压和激光，待仪器预热30min后可进行检测。检测之前，先选取样品点周围至少4个校正点校正靶板。采样时，将激光移至样品孔，点击“Start/stop Active Acquisition Method ”按钮进行采样。 六 关机 检测完毕后，点击“Eject Plate”将板退出，待板进入到“Sample loading chamber”后，点击“Turn on/off High Voltage”按钮关闭高压和激光。 |
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