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3325182

新虫 (初入文坛)

[求助] 转农杆菌后验证 已有2人参与

干扰载体转入农杆菌后如何验证(干扰载体有特殊结构)

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一叶知秋365

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
3325182(晋鹏代发): 金币+1, 鼓励回帖交流~ 2017-07-28 21:40:59
最初构建载体时怎么验证的,现在就怎么验证呀。

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2楼2017-07-12 09:13:50
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Chiuut

新虫 (初入文坛)


3325182(晋鹏代发): 金币+1, 鼓励回帖交流~欢迎常来农林版交流经验~ 2017-09-28 21:29:36
用农杆菌的菌液验证

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3楼2017-07-12 23:58:40
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、转化子的PCR鉴定
挑取转化的农杆菌单菌落接种于含50μg/ml Kanamycin的YM液体培养基中,28℃,220rpm摇培16hr,直接用菌液做PCR。

2、转化子的酶切鉴定
提取农杆菌质粒DNA(同大肠杆菌质粒DNA的提取),然后将其转化大肠杆菌,再提取大肠杆菌的质粒DNA进行酶切鉴定。
及时行乐,人生不留遗憾!
4楼2017-07-13 07:33:24
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