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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 细胞凋亡 试验方法求助
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王丽媛西西西

银虫 (小有名气)

[求助] 细胞凋亡 试验方法求助 已有2人参与

各位大神
         我做的是植物的花的细胞凋亡，主要目的是根据不同时间段采样，以测定发生凋亡的时期。因为所用的样品体积比较小，而且发生凋亡的部分是该样品中很小的一部分，所以，不知道该用哪种方法做细胞凋亡的测定。个人觉得用流式细胞仪等不太现实，因为我的样品发生凋亡的部分特别小，而且制成细胞悬浮液的方法对样品测定效果应该会很不理想。我想问，不制成细胞悬浮液或者细胞爬片，以测定细胞凋亡的方法都有那些？个人已经做了石蜡切片的tunel染色以及免疫组化，不知道还有其他别的方法没有，，望各位大神不吝赐教！
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1楼 2017-07-09 14:39:16
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feilinff

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

WB检测凋亡相关蛋白~
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2楼2017-07-13 14:01:08
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励热心回帖交流 2017-07-13 22:49:30
1、形态学检测法

根据凋亡细胞固有的形态特征，使用合适的显微镜检测凋亡细胞形态变化。
光学显微镜和倒置显微镜
（1）未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。
（2）染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。

荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜
一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。

2、磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin-V）法态学
磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine,PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS 可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中 （图 3）。Annexin-V 是一种分子量为 35～36 KD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与 PS 高亲和力特异性结合。将 Annexin-V 进行荧光素（FITC、PE）或 biotin 标记，以标记了的 Annexin-V 作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。


还有以下方法：

荧光探针双标记法
DNA ladder 法
Annexin V/PI 双染色法
TUNEL 法
Caspase-3 活性检测法
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及时行乐，人生不留遗憾！
3楼2017-07-13 14:26:51
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gaojianwen8

捐助贵宾 (小有名气)
既然知道凋亡不大，那你检测的目的是什么呢

发自小木虫IOS客户端
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4楼2017-07-13 14:51:10
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王丽媛西西西

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-13 14:26:51
1、形态学检测法

根据凋亡细胞固有的形态特征，使用合适的显微镜检测凋亡细胞形态变化。
光学显微镜和倒置显微镜
（1）未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡 ...

我想问，为什么细胞凋亡的检测，测定的是caspase 3 的活性 ，而不是测caspase9 的活性
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5楼2017-07-13 20:20:54
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