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jianwu118

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 求助:甲醇使细胞蛋白质变性会让细胞破裂吗?

我正在做细胞试验,处理样品中有一步是要破碎细胞,我的方法是加入高渗的PBS和甲醇的混合液震荡,然后液氮冻融,从而达到破碎细胞的效果;但是我现在发现甲醇会使蛋白变性,会固定细胞?!那细胞不是就没破了?     这个问题我始终没弄明白,希望各位虫友能给我帮助,谢谢!
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-31 13:58
甲醇是起到细胞固定和脱水的作用,但并不是意味着,细胞固定之后,液氮就不能破壁了,这两者没有必然联系。
你是不是要做免疫学的实验啊?

[ Last edited by sutao1979 on 2009-1-22 at 20:11 ]
会当凌绝顶,一览众山小
4楼2009-01-22 20:07:41
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

破壁主要应当是液氮的作用
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-01-22 01:05:09
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jianwu118

至尊木虫 (著名写手)

那我在液氮冻融之前加了甲醇混合液岂不是先把细胞固定了?
3楼2009-01-22 13:42:46
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★ ★
司马诸葛(金币+3,VIP+0):谢谢指点 8-31 13:58
个人理解:
甲醇使细胞固定,意思是使蛋白变性在细胞原位,因为此时细胞形状已不能轻易改变,细胞失去了本来的柔性,各种细胞成分不会乱动,所以叫固定,此时细胞变的更脆,经过冻融热胀冷缩当然容易碎
固定是变性变脆僵直的过程,不是变得坚不可摧
5楼2009-01-23 00:07:23
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