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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 请教各位大神我的胶跑成这样子的原因，谢谢各位大神
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世界的世界

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位大神我的胶跑成这样子的原因，谢谢各位大神 已有1人参与

携带有木聚糖酶基因重组的毕赤酵母7.5L发酵罐发酵，发酵产物经离心后，取不同诱导时间的表达上清20 μL，与2x上样缓冲液混匀100摄氏度煮沸5min，上样20  μL。制备12%的分离胶和5%的浓缩胶，浓缩胶时电压为8 V/cm，当跑至分离胶时电压改为15 V/cm直至电泳结束。用考马斯亮蓝R-250染色6h左右，然后脱色直至条带清晰。
      2X上样缓冲液：100 mM Tris(pH6.8),200 mM DTT,4%SDS,0.2%溴酚蓝，20%甘油。
      从左往右是不同诱导时间的12h，36h，60h,，72h，96h，108 h，M（97.4,66.2,42.7,31.0,14.4KDa）,之后三条用到是纯化的。
       请教各位，看看我跑的胶有什么问题，怎么跑的好看些。

请教各位大神我的胶跑成这样子的原因，谢谢各位大神
IMG_1984.JPG
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1楼 2017-07-05 18:28:02
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wsjtg123

铁虫 (小有名气)
上样量小点，样品高速离心一下，

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3楼2017-07-09 17:31:14
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andyxzw

新虫 (初入文坛)
我做的是毕赤酵母的木聚，发酵活力国标7万/ML

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9楼2017-07-30 18:05:38
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普通回帖

andyxzw

新虫 (初入文坛)
你好，我也是做木聚糖酶，你这个木聚糖酶发酵活力多少呢

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2楼2017-07-08 09:08:06
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世界的世界

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by andyxzw at 2017-07-08 09:08:06
你好，我也是做木聚糖酶，你这个木聚糖酶发酵活力多少呢

10000IU/mL
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4楼2017-07-12 18:00:43
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世界的世界

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wsjtg123 at 2017-07-09 17:31:14
上样量小点，样品高速离心一下，

上样5ul,10ul,效果不好
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5楼2017-07-12 18:05:03
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enzyme0727

新虫 (小有名气)
那酶活水平不高

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6楼2017-07-13 10:12:13
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世界的世界

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by enzyme0727 at 2017-07-13 10:12:13
那酶活水平不高

那请问需要加大上样量吗？
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7楼2017-07-30 17:08:32
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世界的世界

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by andyxzw at 2017-07-08 09:08:06
你好，我也是做木聚糖酶，你这个木聚糖酶发酵活力多少呢

想请问下您做的是什么菌的木聚糖酶？
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8楼2017-07-30 17:10:00
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往阳光多处走

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by andyxzw at 2017-07-30 18:05:38
我做的是毕赤酵母的木聚，发酵活力国标7万/ML

你好 我也是做的木聚，可以交流一下嘛，我表达跑PAGE没有条带

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10楼2017-08-05 21:13:37
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