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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助荧光定量绝对定量方法
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别泪看青城

新虫 (小有名气)

[求助] 求助荧光定量绝对定量方法 已有1人参与

有没有谁做过荧光定量绝对定量啊，我们要用DNA作为模板，可以请大神发一下你们的方案或者相关文献吗，实验室一小白求助

发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-07-05 15:53:34
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Real-time qPCR定量方法可以分为绝对定量和相对定量。
绝对定量是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线，在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较，从而得到目的基因的量。该标准品可以是纯化的质粒DNA，体外转录的RNA，或者是体外合成的ssDNA。

绝对定量
从标准曲线获得线性方程：
Y=-3.432X+34.638;R2= 0.995, E=95%，所以可以进行数据分析。
如果未知样品的 Ct=25，
代入方程： 25=-3.432X+34.638,
所以： X=2.8
Copies=10^2.8

参看文献Marisa L. Wong and Juan F. Medrano: BioTechniques July 2005。
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-05 17:17:06
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