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求助荧光定量绝对定量方法 已有1人参与
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有没有谁做过荧光定量绝对定量啊，我们要用DNA作为模板，可以请大神发一下你们的方案或者相关文献吗，实验室一小白求助 发自小木虫Android客户端 |
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晋鹏
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【答案】应助回帖
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Real-time qPCR定量方法可以分为绝对定量和相对定量。 绝对定量是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线，在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较，从而得到目的基因的量。该标准品可以是纯化的质粒DNA，体外转录的RNA，或者是体外合成的ssDNA。 绝对定量 从标准曲线获得线性方程： Y=-3.432X+34.638;R2= 0.995, E=95%，所以可以进行数据分析。 如果未知样品的 Ct=25， 代入方程： 25=-3.432X+34.638, 所以： X=2.8 Copies=10^2.8 参看文献Marisa L. Wong and Juan F. Medrano: BioTechniques July 2005。 |
2楼2017-07-05 17:17:06