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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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别泪看青城

新虫 (小有名气)

[求助] 求助荧光定量绝对定量方法 已有1人参与

有没有谁做过荧光定量绝对定量啊,我们要用DNA作为模板,可以请大神发一下你们的方案或者相关文献吗,实验室一小白求助

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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Real-time qPCR定量方法可以分为绝对定量和相对定量。
绝对定量是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线,在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较,从而得到目的基因的量。该标准品可以是纯化的质粒DNA,体外转录的RNA,或者是体外合成的ssDNA。

绝对定量
从标准曲线获得线性方程:
Y=-3.432X+34.638;R2= 0.995, E=95%,所以可以进行数据分析。
如果未知样品的 Ct=25,
代入方程: 25=-3.432X+34.638,
所以: X=2.8
Copies=10^2.8

参看文献Marisa L. Wong and Juan F. Medrano: BioTechniques July 2005。
及时行乐,人生不留遗憾!
2楼2017-07-05 17:17:06
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